Methodenartikel

Identifizierung von Kinase-Inhibitoren, die die Reaktion der Thymozyten auf starke TCR-Signale modulieren

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Chen, E. W., et al. Identifizierung von Mediatoren der T-Zell-Rezeptor-Signalübertragung durch das Screening chemischer Inhibitorbibliotheken. J. Vis. Exp. (2019).

In diesem Video beschreiben wir eine Methode zur Identifizierung der niedermolekularen Kinase-Inhibitoren, die die Apoptose von selbstreaktiven CD4+CD8+ doppelt-positiven unreifen Thymozyten modulieren. Die Apoptose wird in den doppeltpositiven Thymozyten induziert, indem sie mit anti-CD3- und anti-CD28-beschichteten magnetischen Kügelchen aktiviert werden; Es folgt eine Behandlung mit niedermolekularen Inhibitoren und eine Durchflusszytometrie-Analyse, um festzustellen, ob die Inhibitoren die apoptotische Markerexpression modulieren.

Protokoll

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Screening der Kinase-Inhibitor-Bibliothek (zentrifugenunabhängiger Assay)

  1. Behandlung von Thymozyten mit Kinase-Inhibitoren
    1. Bereiten Sie eine Thymozytensuspension vor.
    2. Verdünnen Sie die Thymozyten in vollständigem RPMI, um eine Thymozytensuspension von 25 x 106 Zellen/ml zu erhalten.
    3. Geben Sie 40 μl Thymozyten mit einer Mehrkanalpipette in jede Vertiefung einer Platte mit kleinem Volumen. Lege den Teller auf Eis.
    4. Verdünnen Sie die Inhibitoren von der Rohplatte, DMSO und Dexamethason in vollständigem RPMI in einem Verhältnis von vier Teilen des vollständigen RPMI zu einem Teil Inhibitor/DMSO/Dexamethason (Verdünnungsfaktor von 5).
      Anmerkung: Da die Volumina, die in dieser kleinvolumigen Platte verwendet werden, 5x kleiner sind als bei der herkömmlichen Methode, werden die Inhibitoren und die Kontrollreagenzien fünffach verdünnt, bevor sie den Thymozyten in der Platte zugesetzt werden.
    5. 0,5 μl Kinase-Inhibitoren aus den entsprechenden Vertiefungen der in Schritt 1.1.4 hergestellten Inhibitorplatte in die 96-Well-Platte geben.
    6. Bereiten Sie acht Vertiefungen mit unbehandelten Kontrollen vor. Bereiten Sie vier Vertiefungen mit Vehikel-behandelten Kontrollen vor, indem Sie 0,5 μl des in Schritt 1.1.4 hergestellten DMSO hinzufügen. Bereiten Sie vier Vertiefungen mit 5 μM Dexamethason-behandelten Kontrollen unter Verwendung des in Schritt 1.1.4 hergestellten verdünnten Dexamethasons vor (Abbildung 1).

2. Stimulation von Thymozyten mit Anti-CD3/CD28-Kügelchen

  1. Achten Sie darauf, dass die Perlen gleichmäßig resuspendiert sind. Nehmen Sie 1 ml Perlen und waschen Sie sie mit 2 ml PBS. Trennen Sie die Kügelchen mit einem Magnetständer und saugen Sie die Lösung ab. Resuspendieren Sie die Kügelchen in 1 mL vollständiger RPMI.
    Anmerkung: Das Verhältnis von Kügelchen zu Zellen beträgt 1 zu 2,5. Passen Sie die Anzahl der Kügelchen an, abhängig von der Anzahl der zu stimulierenden Vertiefungen und der Anzahl der verwendeten Thymozyten.
  2. Geben Sie 10 μl Bead-Suspension zu jeder mit Inhibitor, den vier DMSO-behandelten Proben und vier der acht unbehandelten Proben. Geben Sie 10 μl vollständiges RPMI in die verbleibenden vier unbehandelten Wells. Abbildung 1 zeigt das allgemeine Plattenlayout.
    Anmerkung: Das Endvolumen der Wells beträgt 50 μL, was innerhalb der maximalen Kapazität der Wells liegt. Es ist wichtig, Vorsicht walten zu lassen und die Platten aufrecht zu halten, um ein Verschütten der Mulde zu vermeiden.
  3. Zum Mischen rühren Sie die Platte mit einem Mikrotiterplatten-Orbitalschüttler. Alternativ können Sie den Inhalt der Vertiefungen mit einer Mehrkanalpipette mischen.
  4. Inkubieren Sie die Thymozyten in einem 37 °C heißen Inkubator mit 5 % CO2 für 17 - 20 h (oder über Nacht) mit Anti-Verdunstungsdeckel.

>3. Aufbau der Tellerwaschanlage

HINWEIS: Die Anweisungen zum Einrichten der Unterlegscheibe wurden vom Hersteller bereitgestellt. Die Schritte werden im Folgenden kurz erwähnt. Für jeden Priming-Schritt werden etwa 150 ml Lösung benötigt.

  1. Grundieren Sie das Waschsystem mit 70 % Ethanol und 1 % Tween 20.
  2. Grundieren Sie das Waschsystem mit entionisiertem Wasser mit 1 % Tween 20.
  3. Grundieren Sie das Waschsystem mit FACS-Waschpuffer.

>4. Färbung von Oberflächenantigenen

  1. Bereiten Sie eine Antikörperfärbemischung vor, die Anti-TCRβ-, Anti-CD4-, Anti-CD8- und Anti-CD69-Antikörper enthält. Verdünnen Sie die Antikörper in FACS-Waschpuffer im Verhältnis 1:100 (v/v).
  2. Waschen Sie die Platte 9x mit 55 μl FACS-Waschpuffer pro Waschgang mit dem automatisierten Laminar-Flow-Waschsystem.
    Anmerkung: Am Ende der Wäschen verbleiben 25 μl Restvolumen in jeder Vertiefung.
  3. Die Zellen werden in 25 μl des in Schritt 1.4.1 hergestellten Färbeantikörpergemisches resuspendiert.
  4. Wenn die Proben von einer 96-Well-Platte übertragen werden, resuspendieren Sie die Zellen in 50 μl des Antikörpergemisches und übertragen Sie die Proben auf die kleinvolumige Platte. Dieser Schritt entspricht der Methode Nummer 2, wie in Abbildung 2A dargestellt.
  5. Zum Mischen rühren Sie die Platte mit einem Mikrotiterplatten-Orbitalschüttler oder mischen Sie die Proben mit einer Mehrkanalpipette und inkubieren Sie sie 30 Minuten lang auf Eis.

>5. Fixierung von Zellen

  1. Waschen Sie die Platte 9x mit 55 μl FACS-Waschpuffer pro Waschgang mit dem automatisierten Laminar-Flow-Waschsystem.
  2. Fügen Sie einen Fixierungs-/Permeabilisierungspuffer (im Lieferumfang des aktiven Caspase-3-Apoptose-Kits enthalten; dasselbe gilt für den in Schritt 1.6.1 erwähnten 10x Perm/Wash-Puffer und den Anti-Caspase-3-Antikörper in Schritt 1.6.2) in einer Menge von 50 μl pro Vertiefung hinzu.
  3. 30 min auf Eis inkubieren.

>6. Intrazelluläre Färbung für aktive Caspase 3

  1. Bereiten Sie 1x Perm/Waschpuffer vor, indem Sie 25 mL 10x Perm/Waschpuffer in 225 mL Reinstwasser verdünnen.
  2. Bereiten Sie eine intrazelluläre aktive Caspase-Färbung vor, indem Sie 1 ml Anti-Caspase-3-Antikörper zu 2 ml 1x Perm/Wash-Puffer hinzufügen. Das Verhältnis von Antikörper zu Perm/Wash-Puffer beträgt 1:2.
  3. Das Waschsystem mit 1x Dauerwelle/Waschpuffer grundieren.
  4. Waschen Sie die Platte 9x mit 1x Dauerwellen-/Waschpuffer bei 55 μl pro Waschgang.
  5. 25 μl des in Schritt 1.6.2 hergestellten intrazellulären Caspase-Farbstoffs werden in alle Vertiefungen gegeben.
  6. Zum Mischen rühren Sie die Platte mit einem Mikrotiterplatten-Orbitalschüttler oder mischen Sie die Proben mit einer Mehrkanalpipette und inkubieren Sie sie 1 h lang auf Eis.
  7. Waschen Sie die Platte 9x mit 1x Dauerwellen-/Waschpuffer bei 55 μl pro Waschgang.
  8. Geben Sie 25 μl FACS-Waschpuffer in alle Vertiefungen.
  9. Übertragen Sie die Proben nach ausreichendem Mischen durch Pipettieren in Mikrotiterröhrchen.
  10. Geben Sie weitere 50 μl FACS-Waschpuffer in die leeren Vertiefungen und wiederholen Sie Schritt 1.6.9.
  11. Die Schritte 1.6.9 und 1.6.10 wiederholen 2x bis 200 μl der Proben in den Mikrotiterröhrchen gesammelt sind.
    Anmerkung: Der Zweck der in den Schritten 1.6.10 und 1.6.11 beschriebenen Verfahren besteht darin, eine maximale Rückgewinnung der Zellen aus der kleinvolumigen Platte zu gewährleisten. Wenn die Zellzahl keine Rolle spielt, füllen Sie die Mikrotiterröhrchen nach Schritt 1.6.10 einfach auf 200 μl mit FACS-Waschpuffer auf.
  12. Führen Sie eine durchflusszytometrische Analyse der Proben durch und analysieren Sie die Ergebnisse mit einem FACS-Analyseprogramm. Die Caspase-3-Aktivierung und die CD69-Expression werden in dem Gate analysiert, das CD4+CD8+DP-Thymozyten enthält.

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Ergebnisse

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Abbildung 1: Plattenlayout des Thymozytenaktivierungsassays. (Nach oben) Die Spalten 1 und 12 sind für Kontrollen reserviert, während die Spalten 2 bis 11 mit Inhibitoren behandelte Proben (beige) sind. Die Negativkontrolle (nicht stimuliert [NS]; grau) belegt die Vertiefungen A1 bis D1 und die Positivkontrolle für den Zelltod (Dexamethason-behandelt [DEX]; violett) die Vertiefungen E1 bis H1. Die Spalten 2 bis 12 enthalten Thymo...

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Offenlegungen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
RPMIHyCloneSH30027FS
FBSHyCloneSH3007103
L-GlutaminHyCloneSH3003401
NatriumpyruvatHyCloneSH3023901
10-fache PBS Vivantis PB0344 – 1L
Kinase-Screening-Bibliothek (96-Well)Kaiman-ChemieNr. 10505Der genaue Inhalt der Bibliothek kann variieren
DmsoSigma AldrichNr. D2650
DexamethasonSigma AldrichNr. D4902
Anti-CD3/CD28-KügelchenThermo Fisher Scientific11452D
FITC Active Caspase-3 Apoptose-KitBD PharmingenArtikel-Nr.: 550480Enthält Fixierungs-/Permeabilisierungspuffer, 10X Perm/Wash-Puffer und Anti-Caspase-3-Antikörper
DA-Cell Waschmaschine CURIOX HT1000
96-Well-DA-ZellenplatteCURIOX96-DC-CL-05
Antikörper
CD3e BioLegende 100236
TCRbBD Biowissenschaften553174
CD4BD Biowissenschaften740007
CD8BD Biowissenschaften563786
CD69eBiowissenschaftenTel.: 25-0699-42
hemmer
TG003Kaiman-ChemieAus der Kinase-Screening-Bibliothek
TG003Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PKC 412Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
DoramapimodKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PaclitaxelKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ErlotinibKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Necrostatin-5Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NVP-BEZ235Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Phthalazinon-PyrazolKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG 879Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
1-NA-PP1Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Torin 1Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid IIKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
BIBF 1120Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SMI-4aKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid XI (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10657Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. AS-703026Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ChelerythrinchloridKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
TunicamycinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
GSK 1059615Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
RuxolitinibKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Necrostatin-1Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 505124Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
INK128 STÜCKKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Canertinib (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 431542Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PD 173074Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Valproinsäure (Natriumsalz)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PD 0325901Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 203580Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
VX-702Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
EmodinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CHIR99021Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
bioKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Imatinib (Mesylat)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Sunitinib-MalatKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
GefitinibKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PP2Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
3-MethyladeninKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid IKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid IVKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid VKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NSC-663284Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
D 4476Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NU 7026Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
H-9 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Indirubin-3'-MonoximKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
KN-62Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
KN-93Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CGP 57380Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Iso-OlomoucinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
(S)-Glycyl-H-1152 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Bisindolylmaleimid VIII (Acetat)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ST638Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SU 6656Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
LY364947Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 203580 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10621Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
YM-201636Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ZM 447439Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. AS-041164Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NVP-AEW541 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PP242Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ABT-869Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10622Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
17β-Hydroxy WortmanninKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10626Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SU 6668Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10572Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
N,N-DimethylsphingosinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
LY294002Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
U-0126Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
StaurosporinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
KN-92 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AS-605240 (Kaliumsalz)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. O-1918Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Y-27632 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
LeelaminKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PD 98059Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PD 169316Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
TGX-221Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
(S)-H-1152 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. AS-605240Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
D-Erythro-Sphingosin C-18Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
OSU03012Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
JNJ-10198409Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Leelamin (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Arachidonsäure LeelamidKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Laurinsäure LeelamidKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. AS-252424Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10505Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PI-103Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PIK-75 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Sphingosinkinase-Inhibitor 2Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PiceatannolKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SC-1Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
(R)-RoscovitinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
BUCHT-43-9006Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10561Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. AS-604850Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PI3-Kinase α Inhibitor 2Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ML-9Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
TriciribinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Erbstatin AnalogKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
KenpaulloneKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
OlamoucinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-494Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-825Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-1478Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 216763Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 415286Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-17Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
H-8 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
LFM-A13Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. SC-514Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ApigeninKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-18Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10554Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
DRBKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. RG-13022Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Nr. RG-14620Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-490Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-82Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-99Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG 213Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-183Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Lavendustin CKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
ZM 336372Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
5-JodtubercidinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SB 202190Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10571Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NilotinibKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
SP 600125Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
L-Threo-Sphingosin C-18Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
H-89Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
HA-1077 (Hydrochlorid)Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG-370Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
WortmanninKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
AG 1296Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
KT 5823Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
Janex 1Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10574Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10575Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10576Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NH125Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
TWS119Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
NSC-210902Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10577Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CAY10578Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
PD 184161Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
CCT018159Kaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
MyricetinKaiman-Chemie-Aus der Kinase-Screening-Bibliothek
(englisch)

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Schlagwörter

Thymozyten ApoptoseTCR SignalisierungDurchflusszytometrieCaspase 3 AktivierungCD69 ExpressionMagnetbeadsAnti CD3 Anti CD28ZellstimulationFACS Analyse

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