Eine Technik zur Beurteilung der Immunantwort gegen ein Antigen durch Induktion einer Hautentzündung

Zusammenfassung

Quelle: Yao, Y., et al. Intravitale Bildgebung des Neutrophilen-Primings mit IL-1β-Promotor-gesteuerten DsRed-Reportermäusen. J. Vis. Exp. (2016).

Dieses Video demonstriert eine in vivo Technik zur Bewertung eines Testantigens durch Induktion einer Hautentzündung in einem Mausmodell. Das Testantigen – ein Hapten in einer Öl/Aceton-Lösung – wird topisch auf die Haut des Mausohrs aufgetragen, und die Entzündung der Haut wird nach einer angemessenen Zeit beurteilt.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Induktion von Hautentzündungen bei pIL1-DsRoten Mäusen

1. Betäuben Sie die Maus durch intraperitoneale (i.p.) Injektion eines Anästhesiecocktails, der 100 mg/kg Ketamin, 10 mg/kg Xylazin und 1 mg/kg Acepromazin enthält. Ausreichend betäubte Mäuse zeigen keinen Rückzug der Hinterpfote zum Kneifen der Zehen.
2. Tragen Sie die Haarentfernungscreme auf die Rückenfläche beider Ohren der Maus auf. Warten Sie 30 Sekunden bis 1 Minute. Wischen Sie die Ohroberfläche mit wasserbenetzter Watte ab und lassen Sie sie an der Luft trocknen.
3. Messen Sie die Ohrdicke mit einem Mikrometer und setzen Sie die Maus in einen separaten Käfig ein. Beobachten Sie bis zur Genesung von der Narkose (~ 15 - 30 min). Um die durch das Haarentfernungsprodukt verursachte Hautentzündung zu beheben, lassen Sie die Maus 3 Tage ruhen, bevor weitere Experimente durchgeführt werden.
4. 1,25 % (w/v) Oxazolon (OX) werden hergestellt, indem 16,7 mg OX in 1 ml Aceton aufgelöst und 750 μl OX/Aceton-Lösung mit 250 μl Olivenöl gemischt werden. Bereiten Sie die Vehikellösung vor, indem Sie 750 μl Aceton mit 250 μl Olivenöl mischen.
5. Reanästhesierung der Maus durch intraperitoneale (i.p.) Injektion eines Anästhesiecocktails (1.1). Messen Sie die Ährendicke wie zuvor.
6. Tragen Sie 12,5 μl 1,25 % OX auf jede Seite des rechten Ohrs auf. Tragen Sie 12,5 μl Aceton/Olivenöl-Vehikellösung auf jede Seite des linken Ohrs auf.
7. Halten Sie die Maus von den Käfiggenossen getrennt, bis sie vollständig genesen ist, um eine Beleidigung ihrer Ohren durch andere Mäuse zu verhindern, setzen Sie dann die Maus in ihren ursprünglichen Käfig zurück und bringen Sie sie in die Tierhaltung zurück.
   Anmerkung: Die Haarentfernung kann zu leichten Hautentzündungen führen, gefolgt von einer Veränderung der Ohrdicke. Diese geringfügige Entzündung wird 3 Tage später abgeklungen, was durch die normale Ohrdicke bestätigt wird. Nach topischer Anwendung über 24 Stunden zeigen mit OX behandelte Ohren eine signifikante Schwellung (p < 0,01) im Vergleich zu Ohren, die nur mit Vehikellösung behandelt wurden.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Ketaminhydrochlorid	Hospira	NDC 0409-2051-05
Xylazin	LLOYD Labor	NADA #139-236
Acepromazin	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Creme zur Haarentfernung	Kirche & Dwight
Aceton	Fisher Scientific	Nr. A16P4
Oxazolon	Sigma-Aldrich	Nr. E0753