Erzeugung einer exzisionalen Hautwunde in einem Mausmodell mittels Stanzbiopsie

Zusammenfassung

Quelle: Anderson, L. S. et al., Ein Mausmodell zur Bewertung der angeborenen Immunantwort auf eine Staphylococcus aureus-Infektion. J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt ein Stanzbiopsieverfahren, um eine präzise Wunde in einem Mausmodell zu erzeugen. Die Exzision legt die subkutane Hautschicht frei und bietet eine geeignete Stelle für die Untersuchung der Immunreaktionen auf eine lokalisierte Erregerinfektion.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Mausquelle und Gehäuse

1. Ableitung von Lysozyme M-verstärkten grün fluoreszierenden Protein (LysM-eGFP) Mäusen auf einem C57BL/6J-genetischen Hintergrund, wie zuvor beschrieben. Ableitung von LysM-EGFP× myeloischen Differenzierung primärer Reaktion von 88 (MyD88)-/- Mäusen durch Kreuzung von LysM-EGFP-Mäusen mit MyD88-/- Mäusen auf einem C57BL/6J-Hintergrund.
2. Hausmäuse in einem Vivarium. Für diese Studien wurden die Tiere vor der Operation an der University of California, Davis, in Gruppen und nach der Operation einzeln untergebracht. Verwenden Sie Mäuse im Alter von 10-16 Wochen.

>2. Exzisionelle Hautverletzung

1. Verabreichen Sie jeder Maus 100 μl 0,03 mg/ml Buprenorphinhydrochlorid (~0,2 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion.
2. Zwanzig Minuten nach der Injektion setzen Sie 2-4 Mäuse in eine Kammer mit 2-3 Litern pro Minute (LPM) Sauerstoff mit 2-4% Isofluran. Sobald die Mäuse vollständig betäubt sind, übertragen Sie die Mäuse nacheinander in einen Nasenkegel, der mit 2-3 LPM Sauerstoff und 2-4% Isofluran verbunden ist. Stellen Sie sicher, dass die Mäuse vollständig betäubt sind, indem Sie jede hintere Pfote fest zwischen Daumen und Zeigefinger klemmen. Fahren Sie mit dem nächsten Schritt fort, wenn das Tier nicht auf das Kneifen reagiert.
3. Rasieren Sie einen 1 x 2 Zoll großen Abschnitt auf der Rückseite der Maus mit einer elektrischen Haarschneidemaschine und befreien Sie den Bereich mit einem sauberen Tuch oder einer Gaze von Fellabfällen. Vermeiden Sie die Verwendung von Enthaarungslotion, da diese übermäßige Entzündungen verursachen kann.
4. Reinigen Sie die Rückseite der Maus zuerst mit 10 % Povidon-Jod-getränkter Gaze und dann mit 70 % Ethanol-getränkter Gaze. Reinigen Sie den Bereich spiralförmig und bewegen Sie sich von der Mitte des Operationsbereichs nach außen. Warten Sie vor der Operation ca. 1 Minute, bis der Operationsbereich getrocknet ist.
5. Halten Sie den rasierten Rücken der Maus locker zwischen zwei Fingern und drücken Sie eine sterile 6 mm Stanzbiopsie fest in die Mitte des vorbereiteten Operationsbereichs. Ziehen Sie die Haut nicht straff.
   1. Drehen Sie die Stanzbiopsie, um einen kreisförmigen Umriss auf der Haut zu erzeugen, der die Haut in mindestens einem Abschnitt des Umrisses vollständig durchschneidet. Achten Sie darauf, nicht in die darunter liegende Faszie oder das Gewebe zu schneiden.
   2. Verwenden Sie eine sterile Schere und Pinzette, um die Epidermis und Dermis nach dem kreisförmigen Muster zu durchtrennen, das von der Stanzbiopsie geprägt wurde.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
6mm Einweg-Biopsie-Stanze	Integra Miltex	Nr. 33-36
Buprenoprhinhydrochlorid injizierbar	Westliche medizinische Versorgung	7292	0,3 mg/ml
C57BL/6J Mäuse	Jackson Labratory	664
LysM-eGFP-Mäuse	Thomas Graff, Albert-Einstein-Kolleg von New York	Na
MyD88 KO Mäuse	Jackson Labratory	9088
Vlies-Schwämme	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Povidon-Jod 10% Lösung	Aplicare	697731

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