Ein humanes Zervixschleimhautinfektionsmodell zur Untersuchung der HIV-Pathogenese unter ex vivo-Bedingungen

Zusammenfassung

Quelle: Introini, A., et al., Ex-vivo-Infektion von menschlichem lymphatischem Gewebe und weiblicher Genitalschleimhaut mit dem humanen Immundefizienzvirus 1 und Histokultur. J. Vis. Exp. (2018).

Dieses Video zeigt die ex vivo-Infektion von menschlichem Gebärmutterschleimhautgewebe mit dem humanen Immundefizienzvirus Typ 1, HIV-1, und deren Aufrechterhaltung auf Gelatineschwämmen an der Luft-Flüssigkeits-Grenzfläche. Diese Methode ermöglicht die Überwachung der HIV-1-Replikation und Pathogenese im menschlichen Gewebe.

Protokoll

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Dissektion und Infektion der Gebärmutterhalsschleimhaut

HINWEIS: Für optimale Ergebnisse sollten Explantate von Zervixschleimhäuten so schnell wie möglich nach der Operation verarbeitet und infiziert werden, idealerweise am selben Tag der Operation. Alternativ können die Proben über Nacht in CMT (mit Antibiotika ergänzte Nährmedien) bei....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Gelfoam 12-7 mm Resorbierbarer Gelatineschwamm	Pfizer	Artikel-Nr.: 0009-0315-08	Gelfoam und Spongostan eignen sich in der Histokutur sowohl für Tonsillar- als auch für Gebärmutterhalsgewebe gleichermaßen gut.
SPONGOSTAN Standard 70 × 50 × 10 mm Resorbierbarer hämostatischer Gelatineschwamm	Ferrosan Medizinprodukte	Nr. MS0002	Gelfoam und Spongostan eignen sich in der Histokutur sowohl für Tonsillar- als auch für Gebärmutterhalsgewebe gleichermaßen gut.
RPMI 1640 mit Phenolrot und Glutamin	ThermoFisher Scientific	21875034	Um RPMI1640 nicht essentielle MEM-Aminosäuren, Natriumpyruvat, Gentamicin, Amphotericin B und FBS 15% (v/v) hinzuzufügen, um Kulturmedium (CM) herzustellen.
Sterile phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) pH 7,4 ohne Calcium, Magnesium und Phenolrot			Zur Aufbewahrung und zum Transport von chirurgischen Proben. PBS kann durch eine andere isotonische Lösung mit physiologischem pH-Wert ersetzt werden. Kulturmedium eignet sich am besten für die Lagerung über Nacht.
Steriles Wasser in Zellkulturqualität
70%ige Ethanollösung
Desinfektionslösung für die biologische Abfallentsorgung
Sterile Metallzange oder Pinzette
Sterile Metallschere
Steriler, flach wiegender Metallspatel
Sterile Skalpelle und Klingen
6-Well-Zellkulturplatten
Sterile Petrischale, 100 mm × 20 mm
Zellfreies HIV-1-Viruspräparat HIV-1BaL	NIH AIDS-Reagenzienprogramm	510	Das Virus sollte vermehrt werden, um einen Bestand zu erzeugen, der groß genug ist, um mehrere Experimente durchzuführen. Aliquote Virussuspension und Lagerung bei -80 °C. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.
Zellfreies HIV-1-Viruspräparat HIV-1LAI.04	NIH AIDS-Reagenzienprogramm	Nr. 2522	Das Virus sollte vermehrt werden, um einen Bestand zu erzeugen, der groß genug ist, um mehrere Experimente durchzuführen. Aliquote Virussuspension und Lagerung bei -80 °C. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.
Sterile 1,5- und 2-ml-Röhrchen mit Schraubverschluss
Wasserbad auf 37 °C eingestellt
Biologische Sicherheitswerkbank
Trockenbadschüttler mit Heizblock für 1,5 mL Röhrchen, eingestellt auf 37 °C, 300 U/min