Ein Air-Pouch-Mausmodell für die Lipopolysaccharid-induzierte entzündliche Exsudatsammlung

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Lu, Q., et al. Detektion von Migration und Infiltration von Neutrophilen bei Mäusen. J. Vis. Exp.(2020).

Dieses Video beschreibt das Verfahren zur Erzeugung eines Luftbeutels im Unterhautgewebe von Mäusen und zum Sammeln von entzündlichen Exsudaten als Reaktion auf die Verabreichung von Lipopolysacchariden in vivo. In diesem Video wird auch die Analyse der neutrophilen Infiltration im Luftbeutel behandelt.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Assay für Luftbeutel

Erste Lufteinblasung
1. Am Tag 0 werden die Mäuse 3 Minuten lang in einer Gasanästhesiekammer bei einer Geschwindigkeit von 2 l/min vollständig betäubt und die Anästhesie jeder Maus in einer einzigen Beatmungseinheit mit 2 % Isofluran bei einer Geschwindigkeit von 0,5 l/min aufrechterhalten.
  Anmerkung: Eine ausreichende Anästhesietiefe wird durch Einklemmen der Zehen gewährleistet, bevor die Mäuse aus der Kammer in die Einzelbeatmungseinheit gebracht werden. Die Beine sollten sich nicht bewegen, wenn die Zehen eingeklemmt werden.
2. Verwenden Sie einen 0,22-μm-Filter, der an einer 5-ml-Spritze befestigt ist, um ein Volumen von 3 mL sterilisierter Luft zu erhalten.
3. Heben Sie die hintere Haut der anästhesierten Maus mit einer Pinzette an und injizieren Sie mit einer 26 G x 3/8" Nadel subkutan 3 ml sterilisierte Luft.
4. Entfernen Sie die Mäuse nach der Behandlung aus der Beatmungseinheit. Überwachen Sie die Mäuse, um sicherzustellen, dass sie am Leben sind, bis sie sich zu bewegen beginnen.
Zweite Lufteinblasung
1. An Tag 3 werden zusätzlich 3 ml sterilisierte Luft in die zuvor gebildete Lufttasche injiziert, um den Luftbeutel wie in Abschnitt 1.1 beschrieben zu halten.
Behandlung
1. Injizieren Sie am 6. Tag, 6 Stunden vor der Opferung, verschiedene Behandlungen in den Luftbeutel. Injizieren Sie 1 ml phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) als Negativkontrolle. Injizieren Sie 1 ml 1 μg/ml LPS als Positivkontrolle, um eine lokale Entzündung zu induzieren.
2. Betäubung von Mäusen mit 5 % Isofluran für 3 min in einer Gasanästhesiekammer bei einer Geschwindigkeit von 2 l/min und Aufrechterhaltung der Anästhesie jeder Maus in einer einzigen Beatmungseinheit mit 2 % Isofluran bei einer Geschwindigkeit von 0,5 l/min. Bereiten Sie den Waschpuffer gemäß der Materialtabelle vor.
  Anmerkung: Eine ausreichende Anästhesietiefe wird durch Einklemmen der Zehen gewährleistet, bevor die Mäuse aus der Kammer in die Einzelbeatmungseinheit gebracht werden. Die Beine sollten sich nicht bewegen, wenn die Zehen eingeklemmt werden.
3. Waschen Sie für jeden Luftbeutel den Luftbeutel mit 1 mL Waschpuffer und sammeln Sie das entzündliche Exsudat in einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen. Waschen Sie den Luftbeutel 2x mit 2 mL Waschpuffer und sammeln Sie das entzündliche Exsudat im selben Zentrifugenröhrchen.
4. 100 x g für 10 min bei RT zentrifugieren. Den Überstand verwerfen und die Zellen in 1 ml Waschpuffer resuspendieren. Zählen Sie die Zellen, um das Neutrophilenverhältnis mit dem automatischen Hämatologie-Analysator zu quantifizieren.
  Anmerkung: Siehe repräsentative Ergebnisse in Abbildung 1.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Repräsentative Ergebnisse des Air-Pouch-Assays. (A) Abbildung des Air-Pouch-Assays. (B) Repräsentative Ergebnisse der Infiltration von Leukozytenuntergruppen im Air-Pouch-Assay. PBS: Steuerung; LPS: 1 μg/mL LPS. Die Daten werden als Mittelwert ± SD dargestellt.