Generierung eines in vitro Zellkulturmodells für Malaria-HIV-Koinfektionen

Zusammenfassung

Quelle: Finney, C. et al., Ein In-vitro-Modell zur Messung von Immunantworten auf Malaria im Zusammenhang mit HIV-Koinfektionen. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt die Generierung eines in vitro Malaria-HIV-Koinfektions-Zellkulturmodells. HIV-infizierte mononukleäre Zellen aus dem peripheren Blut, die mit Plasmodium falciparum-parasitierten Erythrozyten co-kultiviert werden, unterstützen möglicherweise das Wachstum der anderen und geben Einblicke in die Immunantworten und den Krankheitsverlauf bei HIV- und Malaria-Koinfektionen.

Protokoll

Alle Verfahren zur Probenentnahme wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

VORSICHT: Die Arbeit mit menschlichen Blutproben und menschlichen Malariaparasiten erfordert Vorsichtsmaßnahmen. Tragen Sie immer einen Laborkittel und Handschuhe und arbeiten Sie in einer Biosicherheitswerkbank der Stufe 2. Im Falle einer versehentlichen perkutanen Exposition gegenüber menschlicher Malaria ist bei Health and Safety eine prophylaktische Behandlung zu beantragen. Für die Arbeit mit dem humanen Immundefizienzvirus HIV(+)-Blut sollten auch zusätzliche Sicherheitsüberlegungen angestellt werden. Trage....

Ergebnisse

Abbildung 1. Darstellung des Ficoll-Gradienten nach dem Spin, die die Position der PBMCs demonstriert.

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Alanin	Sigma	A7377
BD Vacutainer ACD Lösung A	BD	364506
BD Vacutainer Natriumheparin	BD	17-1440-02
DPBS (kein Kalzium, kein Magnesium)	Corning	21-031-CV
Fötales Rinderserum	Sigma	F1051	Hitze vor Gebrauch inaktivieren
Ficoll-Paque PLUS	GE Healthcare	17-1440-02
Gentamycin (10mg/ml)	Gibco	15710-064
Hema3 Färbe-Set	Fischer	122-911
HEPES	Fischer	BP310-500
Hypoxanthin	Sigma	H9636
Ionomycin	Sigma	I3909
MEM-nicht-essentielle Aminosäuren (10mM)	Gibco	11140
PMA	Sigma	P8139
RPMI-1640 Pulver	Lebenstechnologien	31800-022
RPMI-1640 mit L-Glutamin und HEPES	Thermo Wissenschaftlich	SH30255.01
Natriumbicarbonat (Pulver, Zellkultur)	Sigma	Nr. S5761
Natriumpyruvat (100mM)	Gibco	11360
Tris (Trizma-Basis)	Sigma	T6066
Trizol	Ambion	15596018
Trypanblau (0,4 %)	Gibco	15250-061
Parasitengasgemisch	Auf besondere Bestellung		3% CO2, 1% O2, Saldo N2