Visualisierung extrazellulärer Fallen in Makrophagen aus humanen bronchoalveolären Lavageflüssigkeiten

Zusammenfassung

Quelle: Sharma, R. et al., Visualisierung extrazellulärer Makrophagenfallen mit konfokaler Mikroskopie. J. Vis. Exp. (2017)

Dieses Video zeigt die Immunmarkierung von Makrophagen extrazellulären Fallen, METs, in bronchoalveolären Makrophagen aus bronchoalveolärer Lavageflüssigkeit und deren Visualisierung mit einem konfokalen Mikroskop.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Makrophagen der bronchoalveolären Lavage (BAL)

1. Verwenden Sie BAL, um Lungenmakrophagen bei (1) menschlichen Probanden durch Bronchoskopie und (2) Mäusen durch intratracheale Aspiration zu erhalten.
   Anmerkung: Der Erwerb der Makrophagen führt in der Regel zu einer gewissen Aktivierung dieser Zellen. Makrophagen werden von Patienten gewonnen, die eine Bronchoskopie benötigen, um ein potenzielles medizinisches Problem zu untersuchen, und nicht a....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Humanproben: Primärantikörper
Kaninchen Anti-Human-H3Cit (Citrullin R26)	Abcam (Englisch	AB5103	10 μg/ml
Maus Anti-Mensch MMP9	Novus Biologisch	AB119906	1:200 Aszites, keine Konzentration angegeben
Kaninchen Anti-Human-PADI2/PAD2	Abcam (Englisch	AB16478	7 μg/ml
Maus Anti-Mensch PADI4/PAD4	Abcam (Englisch	AB128086	10,1 μg/ml
Sekundäre Antikörper
Anti-Kaninchen für Huhn AF 488/	Lebenstechnologien	Nr. A-21441
Anti-Kaninchen für Huhn AF 594	Lebenstechnologien	Nr. A-21442
Anti-Ziegen für Huhn AF 594	Lebenstechnologien	Nr. A-21468
Anti-Maus-Hühnchen AF488	Lebenstechnologien	Nr. A-21200
Software-Programme
Imaris	Bitplane
Bild J	Nih
Um die Intensität von Fluorphoren zu mitteln, kann eine Standard-Office-Anwendung wie Microsoft Excel verwendet werden
Mikroskope
C1 Konfokales Rastermikroskop	Nikon
FV1200 Konfokales Rastermikroskop	Olymp
Humane BAL-Proben aus der Bronchoskopie-Suite des Monash Medical Centre
Medien
RPMI	Sigma-Aldrich	Nr. R8758
Fötales Kälberserum	Sigma-Aldrich	Nr. F0926
L-Glutamin	Sigma-Aldrich	Nr. G7513
Andere Reagenzien
Paraformaldehyd/Periodat/Lysin (PLP) Fixiermittel	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 27387
Natürliches Formalin	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 42904
Deckgläser 12 ml	Sigma-Aldrich	Nr. S1815
Deckgläser 60 x 24 ml	Sigma-Aldrich	Nr. C6875

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