Kanülierung des mesenterialen Lymphgangs in einem Rattenmodell zur Entnahme von Lymphflüssigkeit

Zusammenfassung

Quelle: Trevaskis, N. L., et al. Das Modell der kanülierten Ratte des mesenterialen Lymphgangs: Anwendung auf die Bewertung des intestinalen lymphatischen Wirkstofftransports. J. Vis. Exp. (2015).

Dieses Video zeigt eine Technik zur Kanülierung des mesenterialen Lymphgangs bei Ratten. Diese Methode ermöglicht den direkten Zugriff auf das gesamte Volumen der in der Lymphflüssigkeit vorhandenen Bestandteile.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Kanülierung des Lymphgangs mesenterica

1. Platzieren Sie das Tier mit der rechten Seite in Richtung des Bedieners. Führen Sie die Operation je nach Bedarf mit oder ohne Hilfe eines Operationsmikroskops durch.
2. Die oberste Schicht der Bauchmuskelwand mit einem geraden Schnitt von 4 cm, der sich von der Mittellinie (Xiphoid-Prozess) bis zur rechten Flanke etwa 2 cm unterhalb des Brustkorbs (Rippenrand) erstreckt, mit einer sterilen Skalpellklinge öffnen (siehe Abbildung 1B).
3. Öffnen Sie die restlichen Schichten der Bauchmuskelwand von 4 - 5 mm lateral über die Mittellinie bis zur rechten Flanke mit einer kleinen chirurgischen Schere (siehe Abbildung 1B).
4. Ziehen Sie den Dünndarm unter die linke Bauchmuskelwand zurück und halten Sie ihn mit 2 - 3 Stücken steriler Gaze, die mit normaler Kochsalzlösung getränkt ist, an Ort und Stelle.
5. Überbrücken Sie die Ratte über eine 10-ml-Kunststoffspritze, die horizontal unter dem Rücken der Ratte auf Höhe der rechten Niere platziert wird, um die Visualisierung des mesenterialen Lymphgangs zu erleichtern.
6. Lokalisieren Sie den Ductus mesenterica superior: ein Gefäß mit einem Durchmesser von etwa 0,5 - 1 mm, das senkrecht zur rechten Niere und unmittelbar rostral und parallel zur Arteria mesenterica verläuft (ein pulsierendes dunkelrotes Blutgefäß; siehe Abbildung 1C).
   HINWEIS: Bei nicht nüchternen oder ölvordosierten Ratten ist das Gefäß weiß, undurchsichtig und leichter zu visualisieren als bei nüchternen Ratten, bei denen es ziemlich durchscheinend ist.
7. Untersuchen Sie den Bereich unmittelbar kaudal des großen Lymphgangs mesenterialis superior und der Arteria mesenterialis, um festzustellen, ob ein zweiter, kleinerer akzessorischer Lymphgang vorhanden ist. Falls vorhanden, blockieren Sie den Lymphfluss durch den Gang, indem Sie den Kanal durchtrennen und mit Sekundenkleber verschließen oder eine Naht um den Kanal binden, um sicherzustellen, dass das gesamte aus dem Darm fließende Lymphvolumen aus dem oberen mesenterialen Lymphgang gesammelt wird.
8. Führen Sie eine gerade Zange durch das perirenale Fettbett am unteren Rand der rechten Niere und durch die Bindegewebsschichten unmittelbar unterhalb der Hohlvene, in einer Richtung, die parallel zum Ductus mesenterica superior verläuft.
9. Fassen Sie mit der Spitze der Pinzette die Lymphkanüle und ziehen Sie sie durch das perirenale Fettbett, wobei ein Ende unmittelbar an den Mesenteriallymphgang angrenzt und das andere vom Tier aus auf Höhe der rechten Niere nach außen gerichtet ist.
10. Isolieren Sie den Mesenteriallymphgang durch stumpfe Dissektion von den darüber liegenden Schichten aus Binde- und Fettgewebe. Achten Sie darauf, den Lymphgang nicht zu durchstechen oder zu beschädigen.
11. Nachdem Sie den Lymphgang isoliert haben, bohren Sie ein kleines Loch in den Lymphgang, entweder mit einer Mikroschere, der scharfen Spitze der Juwelierzange oder einer 25-G-Nadel. Achten Sie darauf, das Gefäß nicht vollständig zu durchtrennen.
12. Stellen Sie sicher, dass die Lymphkanüle vollständig mit einer gerinnungshemmenden Lösung gefüllt ist (mit einer Spritze und einer 25-G-Nadel) ohne Luftspalte. Führen Sie die Lymphkanüle ca. 2 - 4 mm in den mesenterialen Lymphgang über das kleine Loch mit Hilfe einer kleinen Pinzette ein.
13. Beobachten Sie die Lymphkanüle einige Minuten lang. Beobachten Sie einen allmählichen Fluss der Darmlymphe aus dem frei sammelnden Ende der Kanüle, wenn die Kanülierung erfolgreich ist. Wenn die Kanülierung nicht erfolgreich ist, wiederholen Sie die Schritte 1.8 - 1.12.
14. Wenn die Kanülierung erfolgreich ist, sichern Sie die Kanüle, indem Sie einen kleinen Tropfen Veterinärkleber über das Eintrittsloch in den Lymphgang geben. Achten Sie darauf, das Gefäß nicht durch das Auftragen von überschüssigem Veterinärkleber zu verschließen.
15. Während Sie darauf warten, dass der Veterinärkleber aushärtet, beobachten Sie den Lymphfluss mehrere Minuten lang, um sicherzustellen, dass die Kanülierung erfolgreich war. Wenn Sie sich über den Erfolg der Kanüle sicher sind, entfernen Sie vorsichtig die Mullstücke, die in der Bauchhöhle platziert wurden, und bringen Sie den Dünndarm in seine ursprüngliche Position.
16. Wiegen Sie die Lymphentnahmeröhrchen vor, beschriften Sie die Röhrchen für die Entnahme von Lymph- und Blutproben und fügen Sie eine gerinnungshemmende Lösung hinzu. Fügen Sie ausreichend Antikoagulanslösung hinzu, um eine Endkonzentration von 1 mg/ml EDTA in sterilem Wasser oder 10 - 20 IE/ml Heparin in der gesammelten Lymphe oder im Blut zu erreichen.
17. Legen Sie einen Lymphentnahmeschlauch mit einem Antikoagulans (Schritt 1.16) an das Ende der Kanüle, um die frei fließende Lymphe zu sammeln.
18. Als nächstes kanülieren Sie den Zwölffingerdarm für die Infusion von Rehydrationslösungen und/oder Formulierungen.

Ergebnisse

Abbildung 1. Fotos von (A) dem Bauch, der zur Vorbereitung der Kanülierung des Lymphgangs rasiert wurde, (B) der Bauchmuskelwand, die mit einem geraden 4 cm langen Schnitt geöffnet wurde, der sich von der Mittellinie bis zur rechten Flanke erstreckte, um Zugang zum Lymphgang zu erhalten, und (C) dem oberen mesenterialen Lymphgang (in gelbem Kreis)...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Sterile Kochsalzlösung	Baxter Gesundheitswesen	AHB 1307	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel hier ist Baxter 100 ml Kochsalzbeutel, Schachtel mit 50 Stück
70 % Ethanol in Wasser	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Chlorhexidingluconat-Lösung (Microshield 4)	Livingstone Deutschland	JJ60243L	Jede Marke kann verwendet werden. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
Betadin-Lösung	Livingstone Deutschland	BU0510	Jede Marke kann verwendet werden. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
Ilium Ketamil (Ketamin 100 mg/ ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
Heparin (35000I.E. in 35 mL	SigmaPharmazeutika	Artikel-Nr.: 337220	http://www.sigmaco.com.au
Kanüle aus Polyethylen (PE) ø 0,96 mm x i.d. 0,58 mm	Mikroröhrchen-Verlängerungen	Artikel-Nr. PE8050	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist PE-Schlauch 0,96 x0,58 mm, 30 m
Kanüle aus Polyethylen (PE) Außendurchmesser 0,8 mm x Innendurchmesser 0,5 mm	Mikroröhrchen-Verlängerungen	Artikel-Nr. PE9658	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist hier PE-Schlauch 0,8 x0,5 mm, 30 m
Markierungen	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Klebstoff für Veterinärmedizin	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
23 Gauge Nadeln	Livingstone Deutschland	DN23GX0,75 LV	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist die Livingstone Einwegnadel, steril, 23GX0,75 Zoll, 100 / BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
25 Gauge Nadeln	Livingstone Deutschland	DN25GX1,0 LV	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hierfür ist die Livingstone Einwegnadel, steril, 25GX1,0 Zoll, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
1 ml Spritze	Livingstone Deutschland	T3SS01TA	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist Terumo Spritze 1 ml Slip Tuberculin 100/Schachtel. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&Suche =T3SS01TA
10 ml Spritze	Livingstone Deutschland	T3SS10SA	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier die Terumo Spritze 10 ml Slip 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&Suche =T3SS10SA
Mulltupfer	Livingstone Deutschland	GSC075	Jede Marke kann verwendet und auf die gewünschte Größe zugeschnitten werden. Beispiel hier sind Mulltupfer mit Baumwollfüllung 7,5x7,5 cm, 8-lagig. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&Suche =GSC075
heizkissen	Ratek	WT1	Jede Marke, die die Temperatur bei 37 °C hält, kann verwendet werden. Ein Beispiel hierfür ist die Warmhalteschale von Ratek.
Operationsmikroskop	Zeiss	Artikel-Nr.: 495005-0014-000	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist hier das Zeiss Stereomikroskop Stemi 2000-C mit Stativ S Double Spot und KL 300 LED. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 x Kleine chirurgische Schere	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Artikel-Nr.: 14060-09	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel hier ist FST Feinschere, 9 cm mit 21 mm Schneide, scharf, gerade. http://www.finescience.ca/ Spezialseiten/Products.aspx? Produkt-ID = 40 & Kategorie-ID = 17
2 x Pinzetten mit gezackter, gebogener Spitze	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Nr. 11001-13	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier die FST 13 cm Pinzette mit Standardmuster und gebogener 2,8x1,4 mm Spitze. http://www.finescience.ca/ Spezialseiten/Products.aspx? Produkt-ID = 405 & Kategorie-ID = 32