Intraduodenale Kanülierung in einem Rattenmodell für immunpathologische Studien

Zusammenfassung

Quelle: Trevaskis, N. L. et al., Das Modell der mesenterialen Lymphgangs kanülierte Ratte: Anwendung auf die Bewertung des intestinalen lymphatischen Arzneimitteltransports.J. Vis. Exp.(2015)

Dieses Video zeigt die intraduodenale Kanülierung in einem Rattenmodell. Nach der Betäubung der Ratte wird der Zwölffingerdarm lokalisiert und eine kleine Punktion erstellt. Eine J-förmige Kanüle mit abgeschrägter Spitze wird vorsichtig eingeführt und gesichert und der Schnitt verschlossen. Das kanülierte Rattenmodell ermöglicht die intraintestinale Infusion für immunpathologische Studien.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Vorbereitungen am Tag vor dem chirurgischen Eingriff

1. Fasten Sie die Ratte bei Bedarf in der Nacht vor der Operation. Stellen Sie sicher, dass die Ratte freien Zugang zu Wasser hat.
2. Bereiten Sie die Lösungen vor, die der Ratte verabreicht werden sollen.
   1. Bereiten Sie eine Rehydrationslösung wie sterile Kochsalzlösung oder Ringers-Lösung vor.
   2. Bereiten Sie nach Bedarf Anästhesielösungen vor. Das Anästhetikum, das in den hier beschriebenen Versuchen verwendet wurde, bestand aus "Cocktail 1", der durch die Kombination von 1,9 ml Ketamin 100 mg/ml, 0,5 ml Xylazin 100 mg/ml, 0,2 ml Acepromazin 10 mg/ml und 2,5 ml Kochsalzlösung hergestellt wurde, und "Cocktail 2", bestehend aus 1 ml Ketamin 100 mg/ml und 0,1 ml Acepromazin 10 mg/ml. HINWEIS: Inhalatives Isofluran oder Sevofluran kann bevorzugt werden, da es eine chirurgische Anästhesieebene über einen längeren Zeitraum bieten kann.
3. Bereiten Sie eine Antikoagulanslösung vor, die 10 mg/ml Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) in sterilem Wasser oder 10 I.E./ml Heparin in Kochsalzlösung enthält, um die Lymphkanüle zu spülen. Bereiten Sie außerdem eine Antikoagulanslösung vor, die 2,5 - 10 I.E./ml Heparin in Kochsalzlösung enthält, um die Kanüle der Halsschlagader zu spülen.
4. Bereiten Sie die Polyethylenkanüle für das Einführen in den Zwölffingerdarm vor (0,96 mm Außendurchmesser, 0,58 mm Innendurchmesser)
   1. Schneiden Sie die Kanüle auf die gewünschte Länge (typischerweise 25 - 30 cm für die Zwölffingerdarmkanüle) und platzieren Sie mit einer sterilen chirurgischen Klinge eine Fase an der Spitze der Kanüle (siehe Abbildung 1).
      Anmerkung: Dies erleichtert das Einführen der Kanüle und reduziert das Auftreten von Kanülenverstopfungen nach dem Einsetzen.
   2. Platzieren Sie einen J-förmigen Ankerpunkt in der intraduodenalen Kanüle, indem Sie einen kleinen Teil der Kanüle wieder auf sich selbst schlingen, ihn mit einem Feuerzeug oder einer Heizplatte erhitzen und dann zuschneiden (siehe Abbildung 1).
5. Befestigen Sie die Lymphkanüle an einer 25-G-Nadel und einer Spritze mit einer gerinnungshemmenden Lösung (hergestellt in Schritt 1.3). Füllen Sie die Lymphkanüle mit der Antikoagulanslösung und lassen Sie die Lösung über Nacht in der Kanüle (O/N), um das Auftreten von Gerinnselbildung in der Lymphkanüle während der Lymphentnahme zu reduzieren.
6. Bereiten Sie Röhrchen für die Entnahme von Lymph- und Blutproben vor. Wiegen Sie die Lymphentnahmeröhrchen vor, beschriften Sie die Röhrchen für die Entnahme von Lymph- und Blutproben und fügen Sie eine gerinnungshemmende Lösung hinzu. Fügen Sie ausreichend Antikoagulanslösung hinzu, um eine Endkonzentration von 1 mg/ml Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) in sterilem Wasser oder 10 - 20 IE/ml Heparin in der gesammelten Lymphe oder im Blut zu erreichen.

>2. Vorbereitungen unmittelbar vor Beginn des chirurgischen Eingriffs

1. Überprüfen Sie die Kanülen, indem Sie sie mit steriler Kochsalzlösung oder Antikoagulanzienlösung spülen, um sicherzustellen, dass sie offensichtlich sind.
2. Bereiten Sie die Ratte auf den chirurgischen Eingriff vor.
   1. Betäuben Sie die Ratte während der Operation und der Probenentnahme.
      Beginnen
      1. Sie z. B. die Anästhesie durch subkutane Injektion von 1,5 ml/kg Cocktail I (aus Schritt 1.2.2) in eine Hautfalte am hinteren Hals der Ratte mit einer 1-ml-Spritze, die an einer 25-G-Nadel befestigt ist. Die Anästhesie wird durch intraperitoneale Injektion von 0,44 ml/kg Cocktail 2 (aus Schritt 1.2.2) etwa stündlich nach Bedarf mit einer 1-ml-Spritze, die an einer 25-g-Nadel befestigt ist, aufrechterhalten.
      2. Stellen Sie vor Beginn der Operation sicher, dass die Anästhesietiefe ausreichend ist, indem Sie die Atemfrequenz, die Schnurrhaarbewegung, den Muskeltonus und die Reaktionen auf Reize wie das Einklemmen des Fußes beobachten. Verabreichen Sie bei Bedarf eine zusätzliche Anästhesie.
   2. Rasieren Sie das Fell aus den Operationsbereichen, zu denen auch die rechte Seite des Bauches gehört, für die Kanülierung des Zwölffingerdarms.
   3. Reinigen Sie die Operationsbereiche aseptisch mit Povidon-Jod-Lösung oder Chlorhexidinlösung und einem 70%igen Ethanol-Peeling. Wiederholen Sie dies 3 Mal für jede Region und schließen Sie mit einer abschließenden Reinigung mit 70 % Ethanol ab.
3. Legen Sie das Tier in Rückenlage auf ein sauberes Laken über einer beheizten Operationsunterlage (37 °C).

>3. Kanülierung des Zwölffingerdarms

1. Platzieren Sie das Tier mit der rechten Seite in Richtung des Bedieners. Führen Sie die Operation je nach Bedarf mit oder ohne Hilfe eines Operationsmikroskops durch.
2. Die oberste Schicht der Bauchmuskelwand mit einem geraden Schnitt von 4 cm, der sich von der Mittellinie (Xiphoid-Prozess) bis zur rechten Flanke etwa 2 cm unterhalb des Brustkorbs (Rippenrand) erstreckt, wird mit einer sterilen Skalpellklinge geöffnet (siehe Abbildung 2B).
3. Öffnen Sie die restlichen Schichten der Bauchmuskelwand von 4 - 5 mm lateral zur Mittellinie bis zur rechten Flanke mit einer kleinen chirurgischen Schere (siehe Abbildung 2B).
4. Ziehen Sie den Dünndarm unter die linke Bauchmuskelwand zurück und halten Sie ihn mit 2 - 3 Stücken steriler Gaze, die mit normaler Kochsalzlösung getränkt ist, an Ort und Stelle.
5. Befestigen Sie die Zwölffingerdarmkanüle an einer Spritze (z. B. 10 ml), die mit der Rehydrationslösung gefüllt ist.
6. Identifizieren Sie den Zwölffingerdarm als den hellrosa (mit mehr Blutgefäßen) Abschnitt des Dünndarms, der bei sanftem Ziehen nach unten den Magen freigibt.
7. Etwa 2 cm unterhalb der Verbindung von Magen und Zwölffingerdarm (Pylorus) mit einer sterilen 23 G Nadel ein kleines Einstichloch in den Zwölffingerdarm bohren.
8. Führen Sie das J-förmige hakenförmige Ende der Zwölffingerdarmkanüle durch das Einstichloch ein. Mit einem Tropfen Cyanacrylatkleber fixieren.
9. Beginnen Sie mit der Hydratation der Ratte, indem Sie die Kanüle an der Rehydrationsspritze befestigen, die in eine Infusionspumpe geladen ist. Laut Literatur liegen die Rehydratationsraten zwischen 0,5 und 3 ml/h.
10. Nach Abschluss der Lymph- und Zwölffingerdarmkanüle verschließen Sie den Schnitt in der Bauchmuskelwand mit Nähten. Schließen Sie dann den Hautschnitt, indem Sie einige Tropfen Gewebekleber (Cyanacrylat) an der Seite des Schnitts auftragen und die Haut auf beiden Seiten des Schnitts zusammendrücken.

Ergebnisse

Abbildung 1. Schematische Darstellung der Form der abgeschrägten Spitze einer Halsschlagader- oder Lymphkanüle und der J-förmigen abgeschrägten Spitze einer Zwölffingerdarmkanüle.

Abbildung 2. Fotos von (A) dem Bauch, der zur Vorbereitung der Kan...

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Sterile Kochsalzlösung	Baxter Gesundheitswesen	AHB 1307	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel hier ist Baxter 100 ml Kochsalzbeutel, Schachtel mit 50 Stück
70 % Ethanol in Wasser	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Chlorhexidingluconat-Lösung (Microshield 4)	Livingstone Deutschland	JJ60243L	Jede Marke kann verwendet werden. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Betadin-Lösung	Livingstone Deutschland	BU0510	Jede Marke kann verwendet werden. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
Ilium Ketamil (Ketamin 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Xylazin 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	TRO-3828	http://www.provet.com.au/
ACP 10 Injektion (Acepromazin 10 mg/ml)	PROVET VICTORIA	VTG-DACP010020	http://www.provet.com.au/
Heparin (35000I.E. in 35 mL)	Sigma Pharmazeutika	Artikel-Nr.: 337220	http://sigmaco.com.au/
Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) Dinatriumsalzdihydrat	Sigma-Aldrich	Nr. E1644	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier das Dinatriumsalz von EDTA von Sigma.
Kanüle aus Polyethylen (PE) ø 0,96 mm x i.d. 0,58 mm	Mikroröhrchen-Verlängerungen	Artikel-Nr. PE8050	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist PE-Schlauch 0,8x0,5 mm, 30 m
Kanüle aus Polyethylen (PE) ø 0,8 mm x i.d. 0,5 mm	Mikroröhrchen-Verlängerungen	Artikel-Nr. PE9658	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist PE-Schlauch 0,96x0,58 mm, 30 m
Lineal	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Markierungen	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Feuerzeug	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
Cyanacrylat-Kleber	jegliche		Jede Marke kann verwendet werden
23 Gauge Nadeln	Livingstone Deutschland	DN23GX0,75 LV	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist die Livingstone Einwegnadel, steril, 23GX0,75 Zoll, 100 / BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN23GX0,75 LV
25 Gauge Nadeln	Livingstone Deutschland	DN25GX1,0 LV	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hierfür ist die Livingstone Einwegnadel, steril, 25GX1,0 Zoll, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DN25GX1,0LV
1 ml Spritze	Livingstone Deutschland	T3SS01TA	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist Terumo Spritze 1 ml Slip Tuberculin 100/Schachtel. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search = T3SS01TA
10 ml Spritze	Livingstone Deutschland	T3SS10SA	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier die Terumo Spritze 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search = T3SS10SA
Mulltupfer	Livingstone Deutschland	GSC075	Jede Marke kann verwendet und auf die gewünschte Größe zugeschnitten werden. Beispiel hier sind Mulltupfer mit Baumwollfüllung 7,5x7,5 cm, 8-lagig. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
heizkissen	Ratek	WT1	Jede Marke, die die Temperatur bei 37 °C hält, kann verwendet werden. Ein Beispiel hierfür ist die Warmhalteschale von Ratek.
OP-Leuchte	Harvard-Apparatur	72-0215 mit 72-0267	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hierfür ist die Harvard-Apparatur V-Lux 1000 Kaltlichtquelle mit gegabeltem Schwanenhals-Lichtleiter, Schwarz, 4,7 mm Faserdurchmesser (jeder Arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
Operationsmikroskop	Zeiss	Artikel-Nr.: 495005-0014-000	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel ist hier das Zeiss Stereomikroskop Stemi 2000-C mit Stativ S Double Spot und KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Naht aus Seide	Livingstone Deutschland	DTSK163019F4	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel hier ist: * Diesen Artikel per E-Mail an meinen Freund senden 3/8 Kreis Reverse Cut Seidennaht 3/0 Faden 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search = DTSK163019F4
Skalpell-Klingen	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Artikel-Nr.: 10020-00	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist die FST Skalpellklinge #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Skalpell-Griff	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Nr. 10004-13	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel hier ist der FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Kleine chirurgische Schere	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Artikel-Nr.: 14060-09	Jede Marke kann verwendet werden. Beispiel hier ist FST Feinschere, 9 cm mit 21 mm Schneide, scharf, gerade. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Pinzetten mit gezackter, gebogener Spitze	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Nr. 11001-13	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier die FST 13 cm Pinzette mit Standardmuster und gebogener 2,8x1,4 mm Spitze. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
2 x Hämostaten	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Nr. 13010-12	Jede Marke kann verwendet werden. Nicht alle Bediener verwenden die Hämostatika. Beispiel ist hier FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostate mit 20 mm Länge x 1,3 mm Breite gezackt, gerade Spitze. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x Nadelhalter für Nahtmaterial	Feinwissenschaftliche Werkzeuge (FST)	Nr. 12001-13	Jede Marke kann verwendet werden. Ein Beispiel ist hier der FST 13cm Hasley Nadelhalter mit 16 mm Länge x 1,9 mm Breitespitze. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70