Etablierung eines Mausmodells für pleural disseminierten Lungenkrebs

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Yasui, H., et al. Nahinfrarot-Photoimmuntherapie für Mausmodelle der Pleuraverbreitung. J. Vis. Exp. (2021)

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines Mausmodells der Pleuraverbreitung durch Injektion von Lungenkrebszellsuspension in die Brusthöhle einer immundefizienten Maus.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

1. Generierung eines pleuralen Verbreitungsmodells

Präparation von Luciferase-exprimierenden Zielzellen und Suspendierung von 1,0 ×^{10 6} Zielzellen in 100 μl phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS)
Anmerkung: Als Zielzellen eignen sich intrathorakale Krebszellen wie Lungenkrebs und MPM. Luciferase-exprimierende Zellen wurden mittels Luciferase-Gentransfektion präpariert, und eine hohe Expression von Luciferase wurde nach > 10 Zellpassagen bestätigt. Die Zellen wurden in einem Medium kultiviert, das mit 10 % fötalem Rinderserum-Penicillin (100 I.E./ml) und Streptomycin (100 mg/ml) supplementiert wurde. Die Anzahl der Zellen wurde entsprechend der Tumorwachstumsrate und dem zeitlichen Verlauf der Behandlung angepasst (1,0,× 10, 5-6,0 × 10⁶ Zellen/Körpergewicht).
Bereiten Sie 8-12 Wochen alte weibliche homozygote athyme Nacktmäuse mit einem bevorzugten Körpergewicht von 19-21 g vor.
Betäuben Sie die Mäuse während des Eingriffs mit Isofluran (Einleitung: 4-5%, Erhaltungstherapie 2-3%); drücken Sie mit einer Pinzette auf den Schwanz, um zu bestätigen, dass es keine Reaktion gibt.
Machen Sie einen Stopper aus Polystyrolschaum und befestigen Sie den Stopper so an der 30 G Nadel, dass die Spitze bei 5 mm bleibt, um Lungenverletzungen zu vermeiden. Biegen Sie die Nadelspitze mit einer sauberen Pinzette oder indem Sie sie gegen einen harten Gegenstand drücken, der mit 70 % EtOH gereinigt wurde, um einen Pneumothorax zu vermeiden (Abbildung 1).
Vorsicht: Achte darauf, dass du dich nicht durchbohrst. Biege die Nadel mit einer Pinzette. Halten Sie den Stopper nicht fest, wenn Sie ihn an der Nadel befestigen. Es ist sicherer, den Stopfen zu kleben, bevor die Zellen in die Spritze gefüllt werden.
Füllen Sie eine Spritze (1 ml) mit Zielzellen und befestigen Sie eine 30G-Nadel mit einem Stopfen.
Desinfizieren Sie die Brust des Tieres vor dem Eingriff mit 70% EtOH.
Stechen Sie eine Nadel durch den Interkostalraum in die Brust der Maus. Durch den damaligen Widerstand beim Aufprall auf die Rippen bewegte sich die Nadelspitze auf und ab. Nach dem Passieren des Interkostalraums drücken Sie die Spritze gegen die Maus und injizieren Sie 100 μl Zielzellen (Abbildung 2).
Anmerkung: Die Maus atmet tief ein, wenn die Nadel richtig in die Brusthöhle eindringt. Durch das Biegen der Nadelspitze konnte ein Pneumothorax und eine unangemessene Injektion von Zellen in die Lunge vermieden werden.
Anmerkung: Eine Punktion der rechten Brustwand wird empfohlen, um das Risiko einer Herzwandpunktion zu vermeiden.
Rollen Sie die Maus 2-3 Mal, um die Zellen in der Brusthöhle zu verteilen.
Setzen Sie die Maus wieder in einen sauberen und warmen Käfig und überwachen Sie sie, bis sie gehfähig ist. Nach dem Eingriff erwacht die Maus aus der Narkose und verhält sich normal.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Einfaches handgefertigtes Gerät für die Zelltransplantation. Befestigen Sie den Stopper aus Polystyrolschaum so an der 30G-Nadel, dass die Spitze bei 5 mm bleibt. Die Spitze der Nadel sollte gebogen werden, um einen Pneumothorax zu vermeiden.

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