Fluoreszeinfärbung in einem Autoimmunmodell für Ratten mit trockenem Auge zur Untersuchung von Hornhautschäden

Zusammenfassung

Quelle: Hou Ahiua, et al. Ein chronisches Autoimmun-Modell für Ratten mit trockenem Auge mit einer Zunahme der Effektorgedächtnis-T-Zellen im Augapfelgewebe. J.Vis. Exp. (2017)

Dieses Video zeigt die Färbung der geschädigten Hornhaut mit Fluoreszeinfarbstoff, um das Ausmaß der autoimmunen Erkrankung des trockenen Auges in einem Rattenmodell zu bewerten. Die grünen Fluoreszenzflecken der gefärbten Kollagenfasern deuten auf geschädigte Zellen des Hornhautepithels hin.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Beurteilung der Merkmale des trockenen Auges

Messen Sie Hornhautschäden mit Fluorescein-Färbung.

1. Geben Sie 2 μl 0,2 % Fluorescein zur Hornhaut der Ratte. Öffnen und schließen Sie die Rattenlider 3 Mal passiv mit einem behandschuhten Finger, um den Fluoreszeinfarbstoff auf der Augenoberfläche zu verteilen.
2. Nach 1 Minute ziehen Sie 1 ml Kochsalzlösung mit einer 3 ml-Spritze (ohne Nadelaufsatz), positionieren Sie die Spritze etwa 2-3 mm vor der Hornhaut und treiben Sie die Kochsalzlösung vorsichtig auf das Auge.
3. Erfassen Sie Bilder unter dem Kobaltblau-Filter (d. h. ~400 nm) eines Mikroskops mit Okularbildgebung bei ausgeschalteter Hintergrundbeleuchtung.
   Anmerkung: Die Bilder wurden anschließend mit einem Benotungssystem analysiert, das gegenüber früheren Veröffentlichungen modifiziert wurde. Die Bilder wurden dann analysiert, indem die Anzahl, Fläche und Intensität der grünen Flecken subjektiv von 0 bis 2 eingestuft wurde, wobei 0 ihre Abwesenheit, 1 eine punktuelle Färbung von weniger als 50 Flecken und 2 eine punktuelle Färbung von mehr als 50 Flecken anzeigt.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Reagenz
Fluorescein-Natrium-Lösung	Bausch & Lomb U.K Limited	Na
Ausrüstung
Stereomikroskop mit Ringlichtbeleuchtung und Kamera	Carl Zeiss	Na