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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis oder EAE-Modell
- Einführung des EAE-Modells
- Verwenden Sie 10 bis 13 Wochen alte weibliche 129S4/SvJae×C57BL/6-Mäuse für die Induktion von EAE.
- Den Mäusen wird subkutan das enzephalitogene Peptid MOG35 - 55 (Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein) (200 μg) in den oberen und unteren Rücken injiziert, emulgiert in 200 μl vollständiges Freund-Adjuvans (CFA), das 400 μg Mycobacterium tuberculosis enthält.
Anmerkung: Als negative, nicht krankheitsauslösende Scheinkontrolle kann ein unvollständiges Freund-Adjuvans, das Mycobacterium tuberculosis enthält, im gleichen Volumen und auf demselben Weg verwendet werden.
- Danach, und erneut 24 Stunden später, geben Sie den Mäusen eine intraperitoneale Injektion von Pertussis-Toxin (insgesamt 0,2 μg, verdünnt in 200 μl phosphatgepufferter Kochsalzlösung, PBS). Verwenden Sie unbehandelte Mäuse als Kontrollgruppe, um erkrankte mit gesunden Tieren vergleichen zu können.
Anmerkung: Es ist auch möglich, EAE mit 200 - 300 μg MOG35 - 55 Peptid, 300 - 500 μg Mycobacterium tuberculosis in der CFA und 0,2 - 0,3 μg Pertussis-Toxin in einem Volumen von 0,1 - 0,2 ml pro Injektion zu induzieren.
- Beginnen Sie eine Woche nach der Injektion und untersuchen Sie die Mäuse täglich auf klinische Symptome (siehe Schritt 1.2.1)
Anmerkung: Der Tag des Krankheitsausbruchs variiert in verschiedenen Experimenten, aber unter den Bedingungen in unserem Labor liegt dieser etwa am 11. Tag und somit wird hier der 14. Tag als 3 Tage nach Krankheitsbeginn definiert. Alle Mäuse in der vorliegenden Studie entwickelten klinische Symptome.
>2. Bewertung der Mäuse
- Klassifizieren Sie die klinischen Symptome nach klinischen Scores wie folgt: 0) keine Anzeichen, 0,5) distale Lähmung des Schwanzes, 1) vollständige Lähmung des Schwanzes, 1,5) schlaffer Schwanz und leichte Schwäche der Hinterbeine, 2) schlaffer Schwanz und starke Schwäche der Hinterbeine, 2,5) schlaffer Schwanz und Lähmung eines Hinterbeins, 3) schlaffer Schwanz und Lähmung beider Hinterbeine, 3.5) Lähmung beider Hintergliedmaßen und Schwäche einer Vordergliedmaße (Mäuse, die diesen Wert erreichten, wurden in Übereinstimmung mit den lokalen ethischen Richtlinien eingeschläfert).