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Ein bakterizider Serumassay für die komplementvermittelte bakterizide Aktivität von Antikörpern

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Weerts, H. P., et al. Ein Shigella-spezifischer bakterizider Hochdurchsatz-Assay. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video zeigt eine Technik zur Bewertung der komplementvermittelten bakteriziden Aktivität von Antikörpern, die im Serum vorhanden sind. Dieser Ansatz kombiniert isoliertes Serum mit pathogenen Bakterien und exogenen Komplementproteinen. Nach der Inkubation werden die Bakterien auf einer Agarplatte gezüchtet und die produzierten Kolonien quantifiziert, um den bakteriziden Serumtiter zu messen.

Protocol

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>1. Komplement- und Zielbakterien vorbereiten

  1. Präparat für Kaninchenbabys (BRC)
    HINWEIS:     Detaillierte Kriterien für die Auswahl von Komplementlos finden Sie hier: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
    1. Holen Sie sich gefrorenes BRC und tauen Sie es mit fließendem kaltem Wasser auf. Mischen Sie das BRC alle ~10-20 Minuten, bis es vollständig aufgetaut ist. Setzen Sie BRC keinen wiederholten Frost-Tau-Zyklen aus.
    2. Während BRC auftaut, beschriften Sie 1,5 ml, 5 mL oder 15 mL Zentrifugenröhrchen. Legen Sie die beschrifteten Röhrchen zum Vorkühlen auf Eis. Aliquotieren Sie das richtig....

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Results

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Abbildung 1: LBA-Platten nach der Farbentwicklung. Repräsentative bakterielle Mikrokolonien von S. flexneri 3a sind über Nacht auf die entsprechende Größe angewachsen. Overlay-Agar wurde hinzugefügt und die Kolonien haben durch Reduktion der TTC-Verbindung im Overlay-Agar eine rote Farbe entwickelt.

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
GelatineSigmaNr. G9391Typ B, Pulver, BioReagenz, geeignet für Zellkultur
TTC (2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid)SigmaNr. T8877≥98,0% (HPLC)
Natriumazid (NaN3)SigmaNr. 2002≥99,5 %
Baby Kaninchen ErgänzungPelFreezArtikel-Nr.: 31061-33-4 Wochen alt
HBSS mit Ca2+/Mg2+InvitrogenNr. 14065-56Ohne Phenolrot
LB Agar (Lennox)SigmaNr. L2897Mikrobielles Wachstumsmedium in Pulverform
Bacto AgarBdArtikel-Nr.: 214010Pulverförmig, (C12H18O9)n
GlycerinSigmaNr. G5516Für die Molekularbiologie ≥99 %
LB Brühe (Lennox)SigmaNr. L3022Mikrobielles Wachstumsmedium in Pulverform
Quadratische PetrischaleSigmaZ617679-240EA120 mm x 120 mm
Assay-PlatteCostar379996 Well U-Bodenplatte mit Deckel
NICE Software (Englisch)Universität von Alabama in Birminghamftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/
kg

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Tags

Serum Bactericidal AssayComplement Mediated Bactericidal ActivityAntibody LPS BindingSerial Dilution ProtocolBacterial Colony EnumerationTTC Overlay AgarHeat Inactivated ComplementMicrobiological IncubatorDigital Colony AnalysisGram Negative Bacteria

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