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Nachweis der Bindung von Vitronectin an bakterielle Oberflächen mittels Durchflusszytometrie

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Singh, B. et al., Assays zur Untersuchung der Rolle von Vitronectin bei bakterieller Adhäsion und Serumresistenz.J. Vis. Exp.(2018)

Dieses Video zeigt den Nachweis der Wechselwirkung von Vitronektin mit bakteriellen Oberflächenproteinen. Die durchflusszytometrische Analyse misst das Fluoreszenzsignal von fluoreszenzmarkierten Antikörpern, die an Vitronektin gebunden sind, und bestätigt damit deren Vorhandensein an der Bakterienoberfläche. Diese Technik bietet Einblicke in Wirt-Pathogen-Interaktionen und potenzielle bakterielle Infektionstherapien.

Protocol

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>1. Analyse von Vitronectin, Vn als bakterieller Oberflächenprotein-Ligand

  1. Nachweis der Vn-Bindung an der Bakterienoberfläche mittels Durchflusszytometrie
    Anmerkung: In der Durchflusszytometrie verwendeten wir Seitenstreuung und Vorwärtsstreuung, um positive Ereignisse zu gaten. Zur Untersuchung der Wechselwirkungen mit Vn, Haemophilus influenzae Typ f, Hif wurden klinische Isolate (n=10) zusammen mit E. coli BL21 (DE3) als Negativkontrolle ausgewählt (Abbildung 1A).
    1. Kultur Hif klinische Isolate in Gehirn-Herz-Infusionsmedium (BHI), ergänzt mit 10 μg/ml ....

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Results

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Abbildung 1: Haemophilus influenzae Serotyp f bindet Vn über oberflächenexprimierte PH.(A) Ergebnisse der Durchflusszytometrie, die die Bindung von Vn an Zellen klinischer Hif-Isolate zeigen. Jedes klinische Isolat (5 x 10,6 KBE) wurde mit 250 nM humanem Vn inkubiert. Der gebundene Ligand wurde mit Hilfe von Anti-Vn-pAbs von Schafen und FITC-ko.......

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
5 mL Polystyrol-Röhrchen mit rundem Boden BD FalkeTel.: 60819-13812 × 75 mm Ausführung
Rinderserumalbumine (BSA)Sigma-AldrichNr. A2058Geeignet für Zellkulturen
Durchflusszytometer BD Biowissenschaften651154Zellanalysequalität für Forschungsanwendungen
Vitronectin (Vn) aus menschlichem PlasmaSigma-AldrichV8379-50UGQualität von Zellkulturen
E. coli-Wirt (E. coli BL21)NovagenArtikel-Nr.: 69450-3Wirt für Proteinexpression
FITC-konjugierte Esel-Anti-Schaf-Antikörper AbD SerotecSTAR88FPolyklonal
Anti-Human-Vn-Antikörper für SchafeAbD SerotecAHP396Polyklonal

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Tags

Vitronectin BindingFlow CytometryBacterial SurfaceAnti vitronectin AntibodiesFluorescence SignalWild type BacteriaMutant StrainProtein HSecondary AntibodiesCentrifugation Wash

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