Ein Mausschwanz-Snip-Verfahren zur peripheren Blutentnahme und Plasmaisolierung

Zusammenfassung

Quelle: Coats, J. S. et al., Expression von exogenem Zytokin in von Patienten stammenden Xenotransplantaten durch Injektion mit einer Zytokin-transduzierten Stromazelllinie. J. Vis. Exp. (2017)

In diesem Video demonstrieren wir ein Verfahren zum Schwanzschneiden in einem Mausmodell, um peripheres Blut zu sammeln. Das gesammelte Blut wird anschließend einer Zentrifugation unterzogen, um Plasma zu trennen, das für weitere Experimente verwendet werden kann.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem JoVE Veterinärprüfungsausschuss überprüft.

>1. Serielle Blutentnahme und Plasmaüberwachung auf exogene menschliche Zytokine bei Mäusen

1. Blutentnahme per Schwanzschere
   1. Desinfizieren Sie die Biosicherheitshaube und montieren Sie den Mäusehalter, die Schere und andere Werkzeuge/Verbrauchsmaterialien für den Eingriff.
   2. Legen Sie die Maus in einen Rückhaltebehälter und sichern Sie den Schlauch, um die Mausbewegung zu minimieren.
   3. Desinfizieren Sie den Schwanz und die chirurgische Schere mit Isopropylalkohol. Tragen Sie eine topische Anästhesiecreme auf den Schwanz auf.
   4. Schneiden Sie mit einer sehr scharfen chirurgischen Schere etwa 0,5 - 1 mm der Schwanzspitze der Maus ab. Etwa 80 μl peripheres Blut werden mit heparinisierten Kapillarröhrchen entnommen.
      Anmerkung: Wenn mit dieser Methode mehr als sechsmal Blut entnommen wird, sollte die Schwanzentfernung in Bezug auf die Menge des entfernten Schwanzes konservativ sein. Je weiter die Schere am Schwanz voranschreitet, desto größer wird der Durchmesser, sie blutet schneller und die Heilung dauert länger.

>2. Plasma-Trennung

1. Übertragen Sie das Blut mit einer Kolbenspritze (um es aus den Kapillarröhrchen auszustoßen) in ein beschriftetes K₂EDTA Microtainer-Röhrchen; 20 Mal invertieren, um eine Gerinnung zu verhindern.
   Anmerkung: In der Regel erfolgt die Blutgerinnung aus dem Schwanzknips schnell. Wenn die Blutung jedoch länger als ~ 2 Minuten anhält, verwenden Sie einen blutstillenden Bleistift/Pulver, um die Gerinnung zu unterstützen.
2. Zentrifugieren Sie die Blutentnahmeröhrchen gemäß den Anweisungen des Herstellers und aliquotieren Sie das Plasma für die Lagerung (-20 °C), bis es für die weitere Analyse bereit ist.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Tierimplantierbarer Nano-Transponder mit Kanüle	Trovan	ID-100B(1,25)
EMLA Lidocain-Anästhesiecreme (wird durch Rezept über die Tierpflegeeinrichtung bezogen)	Beschriftung	Beschriftung
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Insulinspritze 28G1/2	Bd	#329461
BD Microtainer-Röhrchen mit K2EDTA	Bd	#365974
Zentrifuge	Beckman Coulter	Alegra X-15R
FisherBrand Kapillarröhrchen (heparinisiert)	Fisher Scientific	Tel.: 22-260-950
Hämozytometer	Fischer	Tel.: 02-671-6
MACSQuant Analysator 10	Miltenyi Biotec	Tel.: 130-096-343
Maus-Pie-Käfig	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
Maus Schwanz Illuminator Rückhaltemaschine	Braintree Scientific, Inc.	MTI STD
Pistolengriff-Implantator	Trovan	IM-300(1.25)
"NSG-Mäuse" NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, männlich oder weiblich, Alter 6 – 8 Wochen	JAX-Mäuse	# 005557