Dreidimensionale quantitative Phasenbildgebung zur Charakterisierung von Lymphozyten-Subtypen

Abstract

Quelle: Yoon, J. et al. Markierungsfreie Identifizierung von Lymphozyten-Subtypen mittels dreidimensionaler quantitativer Phasenbildgebung und maschinellem Lernen. J. Vis. exp.(2018)

Dieses Video demonstriert die markierungsfreie Identifizierung der Lymphozytenmorphologie und -biochemie durch quantitative 3D-Phasenbildgebung. Diese Technik ermöglicht eine gründliche Analyse von Lymphozyten und deckt ihre inneren Strukturen und Eigenschaften auf, ohne dass Markierungsverfahren erforderlich sind.

Protocol

>1. Durchflusszytometrie und Sortierung von Lymphozyten-Subtypen

HINWEIS: Das Sortieren von Lymphozyten in Abhängigkeit vom Zelltyp ist essentiell für die Etablierung der grundrichtigen (d.h. korrekten) Zelltyp-Markierungen, um einen Zelltyp-Klassifikator im überwachten Lernen zu trainieren und zu testen. Die Durchflusszytometrie, eine Goldstandardmethode, wird zur Identifizierung und Trennung von Lymphozyten eingesetzt.

1. Stellen Sie eine Mischung aus Antikörpern zur Oberflächenmarkerfärbung in 100 μl frischem RPMI-1640-Medium [mit 10 % FBS, 0,1 μg CD3e (17A2), CD8a (53-6,7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Durchflusszytometrie	BD Biowissenschaften	Arie II oder III
Bildgebungskammer	Tomocube, Inc.	TomoSchale
Holotomographie	Tomocube, Inc	HT-1H
Holotomographie-Bildgebungssoftware	Tomocube, Inc.	TomoStudio
Bildverarbeitungssoftware	MathWorks (Englisch)	Matlab R2017b
Falcon konisches Zentrifugenröhrchen	ThermoFisher Scientific	14-959-53A	ca. 15 mL
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 806544-500ML
Ammoniumchlorid-Kalium-Lysing-Puffer	ThermoFisher Scientific	A1049201
RPMI-1640 mittel	Sigma-Aldrich	Nr. R8758
Fötales Rinderserum	ThermoFisher Scientific	10438018