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Ein Assay zur Messung der chemisch induzierten Zytotoxizität in präzisionsgeschnittenen Lungenscheiben von Menschen

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Neuhaus, V. et al., Bewertung der zytotoxischen und immunmodulatorischen Wirkungen von Substanzen in präzisionsgeschnittenen Lungenschnitten für den Menschen.J. Vis. Exp.(2018)

Dieses Video veranschaulicht eine Technik zur Bewertung der Zytotoxizität in menschlichen präzisionsgeschnittenen Lungenschnitten durch den WST-1-Assay. Menschliche, präzisionsgeschnittene Lungenscheiben werden inkrementellen Konzentrationen einer zytotoxischen Chemikalie ausgesetzt, um ihre Zytotoxizität zu quantifizieren. Eine Abnahme der Farbintensität dient als Bestätigung für die schädliche Wirkung der Chemikalie auf die Lungenzellen.

Protocol

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Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Allgemeine Vorbereitung von präzisionsgeschnittenen Lungenschnitten für Menschen (PCLS) und anschließende Exposition gegenüber Chemikalien

HINWEIS: Zwei Personen werden benötigt, um eine Lunge zu füllen. Ein aktueller Impfpass für Hepatitis A und B wird empfohlen. Die Patienten werden vor einer Lungentransplantation routinemäßig auf das Hepatitis-C-Virus (HCV) und das humane Immundefizienzvirus (HIV) untersucht. Wird eine aktive Infektion mit Mycob....

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Silikonschlauch 3,0 x 5,0 mmA. Hartenstein (Leipzig, Deutschland)SS04
SpritzeFaust Lab Science (Klettgau, Deutschland)9.410 050
Werkzeuge zum Bohrenmaßgearbeitetmaßgearbeitet
Griff der Trimmklinge (FEATHER)pfm medical ag (Köln, Deutschland)205530001
Trimmklingen (FEATHER)pfm medical ag (Köln, Deutschland)Artikel-Nr.: 205500000
Mikrotom: Tissue SlicerAlabama F&E (Bad Homburg, Deutschland)303400-ADPTKrumdieck Tissue-Schneidemaschine (MD6000)
Mikrotom-KlingeWilkinson Sword (Solingen, Deutschland)ENR-4027800011506
Filter für Zellsieb (100 μm Nylon)Becton Dickinson (Heidelberg, Deutschland)BD352360
ImpfschlaufeCopan Diagnostics (Murrieta, USA) CD176S01
TPP Gewebekulturplatten 24wellsSigma (München, Deutschland)Z707791-126EA
Nunc MaxiSorp mit flachem BodenFisher Scientific GmbH (Hannover, Deutschland)Tel.: 44-2404-21
Nunc MicroWell 96-Well Thermo Scientific (Schwerte, Deutschland)260836
Multiwell-ReaderTecan Group AG (Männedorf, Schweiz)Tecan infinite F200ProTeller-Leser
Schüttler für TellerEdmund Buehler GmbH (Hechingen, Deutschland)KM-2 Akku
Assays
Reagenz für Zellproliferation WST-1Roche (Basel, Schweiz)11644807001
reagenzien
Agarose, niedrige Geliertemperatur Sigma (München, Deutschland)Nr. A9414-100G
Ausgewogene Salzmischungen und -lösungen, Zellkultur, klassische Medien und Salze, Earle's Balanced Salts (EBSS)Sigma (München, Deutschland)E2888-500ML
Penicillin und StreptomycinLonza (Verviers, Belgien)17-602E
Dulbecco's Modifizierter Eagle's Medium Nährstoffmischung F-12 Schinken (DMEM F-12)Gibco (Darmstadt, Deutschland)Tel.: 11039-047Nährmedium
Dulbecco-Phosphat mit Ca und Mg (DPBS)Lonza (Verviers, Belgien)BE17-513F Pufferlösung
ReinigungsmittelmittelSigma (Saint Louis, Vereinigte Staaten von Amerika)X100-100MLTriton X-100
kg

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Human Precision Cut Lung SlicesWST 1 AssayCytotoxicity MeasurementTest Agent ConcentrationFormazan AbsorbanceMicroplate ReaderOrbital ShakerTissue ViabilityCell Membrane DisruptionMetabolically Active Cells

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