Ein Assay zur Beurteilung der Phagozytose und der oxidativen Burst-Aktivität in Granulozyten und Monozyten

Zusammenfassung

Quelle: Meaney, M. P. et al., Messung der Granulozyten- und Monozyten-Phagozytose und der oxidativen Burst-Aktivität im menschlichen Blut. J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video zeigt den Assay zur Bestätigung der phagozytischen Aktivität von Zellen im menschlichen Blut mittels Durchflusszytometrie. Die Granulozyten und Monozyten bestätigen ihre phagozytäre Aktivität, indem sie eine grüne und rote Fluoreszenz zeigen, die das Vorhandensein von verschlungenen Bakterien bzw. oxidative Burst-Aktivität bestätigt.

Protokoll

Alle Eingriffe mit menschlichen Teilnehmern wurden in Übereinstimmung mit den institutionellen, nationalen und internationalen Richtlinien für das Wohlergehen des Menschen durchgeführt und vom lokalen institutionellen Prüfungsausschuss überprüft.

>1. Vorbereitung des Assays

1. Sammeln, vorbereiten und organisieren Sie die für das Verfahren spezifizierten Materialien (siehe Tabelle der spezifischen Materialien/Geräte).
   1. Etikettieren Sie 12 x 75 mm Rohre.
      1. Für jeden Teilnehmer sind zwei Röhrchen zu beschriften: ein Röhrchen für den Phagozytose-Assay (dieses Röhrchen mit schwarzer Tinte und eine....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
12 x 75 mm Rohre, mit Kappe	VWR	Nr.: 20170-579	Sie benötigen 2 Röhrchen pro Probe ("H" und "F") plus 3 Röhrchen pro Charge (nur für Assay-Kontrollen; "F", "H" und "Blut").
PBS (10X), pH 7,4	Lebenstechnologien	Tel.: 70011-044
0,2 μm Celluloseacetat-Filter mit Flaschenaufsatz (500 ml Fassungsvermögen)	Fisher Scientific	Tel.: 09-741-07
Glukose, Pulver	Lebenstechnologien	Artikel-Nr.: 15023-021
Zitronensäure (wasserfrei, in Zellkultur getestet, in Pflanzenzellkultur getestet)	Sigma-Aldrich	C2404-100G
Tribasisches Dihydrat Natriumcitrat	Sigma-Aldrich	Nr. S4641-25G
Dihydroethidium (Hydroethidin) (HE)	Lebenstechnologien	Nr. D11347
Dimethylsulfoxid (DMSO) wasserfrei	Lebenstechnologien	Nr. D12345
Staphylococcus aureus (Holzstamm ohne Protein A) BioPartikel, Fluorescein-Konjugat (FITC)	Lebenstechnologien	Nr. S2851
Staphylococcus aureus (Holzstamm ohne Protein A) BioPartikel, unmarkiert	Lebenstechnologien	Nr. S-2859
Trypanblau-Lösung, 0,4 %	Lebenstechnologien	Tel.: 15250-061
4,0 mL Vacutainer mit 7,2 mg K2EDTA, sprühgetrocknet	VWR	BD367861	Sie benötigen 1 K2 EDTA-Blutentnahmeröhrchen pro Probe.
4,0 mL Vacutainer mit 68 USP-Einheiten Lithium-Heparin, spritzbeschichtet	VWR	BD367884	Sie benötigen 1 Lithium-Heparin-Blutentnahmeröhrchen pro Probe.
SCCHAR AC·T 5diff CP	Beckman Coulter	6605705	z. B. Hämatologie-Analysator
COULTER AC·T 5diff Spülung	Beckman Coulter	8547167
SCHAR Ac·T 5diff Fix	Beckman Coulter	8547171
SCCHAR AC·T 5diff WBC Lyse	Beckman Coulter	8547170
SCCHAR AC·T 5diff HGB Lyse	Beckman Coulter	8547168
COULTER Ac·T 5diff Cal Kalibrator	Beckman Coulter	7547175
COULTER Ac·T 5diff Control Plus	Beckman Coulter	7547198
AcT 5diff Verdünnungsmittel	Beckman Coulter	8547169
200 μl Pipettenspitzen mit verlängerter Länge	VWR	Tel.: 37001-526
Isolierte Eispfanne	VWR	Tel.: 89198-980	Für ein Eiswasserbad.
Offenes Röhrchengestell aus Metall	VWR	Tel.: 60916-702
Fötales Rinderserum	Lebenstechnologien	Tel.: 26140-111
TQ-Prep Workstation	Beckman Coulter	6605429	d.h. automatisierte Workstation zur Vorbereitung der Zelllyse
ImmunoPrep Reagenziensystem	Beckman Coulter	7546999	d.h. RBC-Lyse/WBC-Fix-Reagenziensystem
COULTER CLENZ	Beckman Coulter	8546929