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Ein molekularbasierter Assay zur Quantifizierung von Influenza-A- und -B-Viren

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8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Otto, C. C. et al., Schneller molekularer Nachweis und Differenzierung von Influenzaviren A und B. J. Vis. Exp. (2017)

Das Video zeigt einen Assay zur Quantifizierung der Influenzaviren A und B. Dieser Assay verwendet eine Nicking-Endonuklease-Amplifikation mit Influenza-spezifischen Primern und eine Zieldetektion mit molekularen Beacon-Sonden.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Vor dem Ausführen des Assays

HINWEIS: Der Influenza A- und B-Assay ist für Nasopharynxabstrichproben und für Nasopharynxabstriche zugelassen, die in viralen Transportmedien gelagert werden. Tupfer sind im Kit enthalten und sollten für eine optimale Leistung verwendet werden. Aber auch Viskose, Schaumstoff, beflockte Tupfer oder Nasentupfer aus Polyester können zur Entnahme von Nasenabstrichproben verwendet werden.

  1. Um eine Nasenabstrichprobe zu entnehmen, führen Sie den Tupfer in das Nasenloch ein, das die sichtbarste Drainage aufweist oder am stärksten verstopft ist. Schieben Sie den Tupfer mit sanfter Drehung in das Nasenloch, bis er auf Widerstand trifft, und drehen Sie ihn mehrmals gegen die Nasenwand, bevor Sie ihn langsam aus dem Nasenloch entfernen. Bewahren Sie die Tupfer auf und transportieren Sie sie in Fläschchen mit 3 ml Virustransportmedien (VTM).
    HINWEIS: Es muss sorgfältig auf eine angemessene Probenentnahme geachtet werden, da eine unzureichende Probenentnahme zu fehlerhaften Ergebnissen führen kann.
    HINWEIS: Tupferproben sollten so bald wie möglich nach der Entnahme getestet werden. Sie können jedoch bis zu 2 Stunden bei Raumtemperatur gelagert oder bis zu 24 Stunden bei 2-8 °C gekühlt werden, wenn die Tests nicht sofort verfügbar sind. Frisch entnommene Proben sind ideal für eine optimale Prüfleistung. Unsachgemäße Handhabung, Lagerung und/oder Transport von Proben können zu fehlerhaften Ergebnissen führen.
    HINWEIS: Als Vorsichtsmaßnahme sollten Personen, die diesen Test durchführen, alle Proben als potenziell infektiös behandeln, indem sie beim Umgang mit Proben allgemeine Vorsichtsmaßnahmen befolgen.
  2. Bringen Sie alle Proben vor dem Test auf Raumtemperatur.
    HINWEIS: Alle Testkomponenten sind nur für den einmaligen Gebrauch bestimmt und sollten nicht zur Durchführung mehrerer Tests verwendet werden. Mischen Sie keine Kit-Komponenten aus unterschiedlichen Chargennummern. Verwenden Sie Kit-Reagenzien nicht nach ihrem Verfallsdatum.
  3. Bringen Sie den blauen Probenbehälter vor dem Test auf Raumtemperatur. Die orangefarbene Testbasis kann getestet werden, ohne dass sie auf Raumtemperatur erwärmt werden muss.
  4. Lassen Sie alle Proben bis unmittelbar vor der Verwendung in der Folienhülle. Schalten Sie das Instrument ein, indem Sie den Netzschalter an der Seite des Instruments drücken. Geben Sie die Benutzer-ID ein und drücken Sie auf "OK.

>2. Ausführen des Tests

  1. Um den Testvorgang zu starten, berühren Sie "Test ausführen" auf dem Bildschirm des Geräts. Geben Sie die Patienten-ID über die Bildschirmtastatur oder den Barcode-Scanner ein und drücken Sie "OK". Öffnen Sie den Deckel und setzen Sie die orangefarbene Testbasis in den orangefarbenen Testsockelhalter ein.
  2. Vergewissern Sie sich, dass der richtige Test auf dem Bildschirm angezeigt wird, und drücken Sie "OK". Setzen Sie den blauen Probenempfänger in den blauen Probenempfängerhalter ein.
    HINWEIS: Öffnen Sie den Probenempfänger nicht, bevor Sie ihn in das Gerät einsetzen, da dies verhindert, dass der Elutionspuffer die richtige Betriebstemperatur erreicht, und die Testleistung beeinträchtigen kann.
  3. Warten Sie, bis sich der Probenempfänger aufgewärmt hat. Entfernen Sie auf Aufforderung des Instruments die Folienversiegelung und legen Sie den zu testenden Patiententupfer in den Probenempfänger.
    HINWEIS: Legen Sie beim Entfernen der Folie zwei Finger auf die Kante des Probenempfängers, um sicherzustellen, dass sie an Ort und Stelle bleibt.
  4. Mischen Sie den Tupfer 10 Sekunden lang kräftig in die Flüssigkeit und drücken Sie den Tupferkopf beim Mischen gegen die Seite des Probenempfängers, um die Probe aus dem Tupfer zu lösen. Drücken Sie 'OK', um fortzufahren. Wenn die Testtupfer in einem viralen Transportmedium gelagert werden, den VTM 10 Sekunden lang vortexen und dann 200 μl in den Probenempfänger geben.
  5. Drücken Sie die weiße Transferpatrone in den blauen Probenbehälter. Drücken Sie weiter auf den Probenempfänger, bis die orangefarbene Anzeige aufleuchtet.
  6. Heben Sie die Transferkartusche an und verbinden Sie sie mit der Testbasis. Beobachten Sie, wie sich die orangefarbene Anzeige senkt, sobald die Kartuschenübertragung richtig angebracht ist. Schließen Sie den Deckel und öffnen Sie ihn erst, wenn die Meldung "Test abgeschlossen" auf dem Bildschirm angezeigt wird.

>3. Qualitätskontrolle (QC)

  1. Tippen Sie auf dem Startbildschirm auf "QC-Test durchführen". Wählen Sie den QC-Test aus, der ausgeführt werden soll. Bestätigen Sie, dass der Testtyp mit der für den Test vorgesehenen QC-Probe übereinstimmt, indem Sie auf "OK" tippen und den Anweisungen auf dem Bildschirm folgen, um den Test abzuschließen.

>4. Interpretation des Ergebnisses

  1. Beobachten Sie nach Abschluss des Testlaufs die Ergebnisse des Tests, die auf dem Bildschirm angezeigt werden, mit Interpretationen für das Vorhandensein von Influenza A, B und unbekannten Subtypen. Bei ungültigen Ergebnissen wiederholen Sie den Test.

>5. Wartung und Reinigung

  1. Reinigen Sie das Instrument und den umgebenden Bankbereich täglich mit 70 % Ethanol oder 10 % Bleichlösung. Sprühen Sie die Reinigungslösung zum Reinigen auf ein feuchtes, fusselfreies Tuch. Gießen Sie die Lösungen nicht direkt auf das Instrument.

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Offenlegungen

Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Alere i InstrumentAlereNAT-000 (Global), NAT-024 (USA)
Alere i Influenza A & B 24 Test KitAlere425-000 (weltweit), 425-024 (USA)
Alere i Barcode ScannerAlereEQ001001
Alere UniversaldruckerAlere55115 (Global), alereiprinter (US)
200 μl Präzisionspipette
200 μl Einweg-Pipettenspitzen
Virales TransportmediumRemelM4-RT

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Schlagwörter

Nachweis von Influenza ANachweis von Influenza BNicking Endonuklease AmplifikationMolecular Beacon Sondenvirale RNA AmplifikationFluoreszenzquantifizierungAufbereitung von NasopharyngealprobenBetrieb der TransferkartuscheVorbereitung des Probenempf ngersValidierung von QC Tests

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