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Methodenartikel

Ein Assay zum Nachweis von Autoantikörpern in humanem Serum unter Verwendung einer neuronalen Kultur aus dem Hippocampus

704 Aufrufe

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Cunquero, M., et al. Hippocampal Neuronal Cultures to detect and study new pathogenic antibodies, involved in autoimmune encephalitis. J. vis. exp. (2022)

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Identifizierung von Antikörpern gegen spezifische Antigene in einer Probe unter Verwendung einer neuronalen Kultur des Hippocampus der Ratte. Durch die Exposition kultivierter Neuronen gegenüber Patientenproben, die Autoantikörper enthalten, die auf N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptoren (NMDARs) abzielen, wird das Vorhandensein von Autoantikörpern, die an die neuronale Oberfläche gebunden sind, durch Immunfärbung nachgewiesen.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

TEIL 1: Etablierung von dissoziierten, fötalen, hippokampalen neuronalen Kulturen von Nagetieren

>1. Vorbereitende Schritte

  1. Poly-L-Lysin (PLL) Beschichtung der Beschichtungsoberflächen (3 Tage vor der Dissektion)
    1. Bereiten Sie den Boratpuffer vor, indem Sie 2,38 g Borsäure und 1,27 g Borax zu 500 ml destilliertem Wasser hinzufügen und 15 Minuten lang rühren, bis er sich aufgelöst hat. Unter einer Haube die Pufferlösung durch Filtri....

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Visuelles Protokoll für Primärkulturen von Hippocampus-Neuronen. (A) Flussdiagramm, das die drei Teile des Protokolls für die Vorbereitung dissoziierter Zellkulturen von Hippocampus-Neuronen aus embryonalen Ratten bei E18 zeigt. Das Protokoll ist unterteilt in 1. Hippocampus-Isolation, 2. Zelldissoziation und 3. Aussaat von Zellen. (B) Auswahl empfohl.......

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Offenlegungen

Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
10 cm ZellkulturschaleNuncTel.: 12-565-020
12 mm runde DeckgläserFischerNC9708845
20x NA 0,75 S Fluor Luft ObjektivNikonCFI Super Fluor 20X
3,5 cm ZellkulturschaleNuncTel.: 12-565-90
6 cm ZellkulturschaleNuncTel.: 12-565-94
B27 BeilageGibcoArtikel-Nr.: 17504-044
Becherglas 100 mLPirex-
BoraxSigma-AldrichNr. B9876
BorsäureSigma-AldrichNr. B0252
Gebogene PinzetteFSTNr. 11009-13
D-GlukoseSigma-AldrichNr. D9434
DMEM High Glucose (4,5 g/L), ohne L-Glutamin, ohne PhenolrotSteinbockDMEM-HXRXA
Weibliche Wistar-Ratte (18. Tag schwanger)Janvier-
Fötales Rinderserum (FBS)Biowest (Biowesten)Nr. S181B-500
Feinwinklige PinzettenFSTNr. 11251-35
Fein gekrümmte PinzetteFSTNr. 11272-30
Fein-gerade PinzetteFSTNr. 11251-23
FITC-FilterwürfelNikonStandard-Serie
ZangeFSTNr. 11000-12
Ziege Anti-Mensch AF488InvitrogenNr. A11013
HBSSSteinbockHBSS-1A
HEPESSigma-AldrichNr. H3375
Hibernate-E mittelGibcoNr. A12476-01
Pferdeserum (HS)Thermofischer26050088
Humaner Anti-NMDAR-Antikörper (CSF)Patienten-Probe-
Humaner Anti-NMDAR-Antikörper (Serum)Patienten-Probe-
ImageJ/FidschiNihv1.50i
Inverses FluoreszenzmikroskopNikonEclipse TE2000-U
Phosphatgepufferte KochsalzlösungGibco10010023
Poly-L-Lysin (PLL)Peptid internationalOKK-35056
Eisschale aus Polystyrol--
Präzisions-FederschereFSTNr. 15000-08
ProLong Gold mit DAPI (Antifading-Eindeckmedien)Molekulare SondenNr. P36941
SchereFSTNr. 14068-12
NatriumpyruvatBiowest (Biowesten)Nr. L0642-100
StereomikroskopZeissStemi 2000
Chirurgische SchereFSTNr. 14081-09
Trypsin 2,5%Gibco15090046
Wasser, steril endotoxinfreiSigma-AldrichW3500

Tags

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