Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. In vivo PET-Bildgebung mit 89Zr-DFO-J591
VORSICHT: Dieser Schritt des Protokolls beinhaltet die Handhabung und Manipulation von Radioaktivität. Bevor diese Schritte durchgeführt werden, sollten sich Forscher mit der Strahlenschutzabteilung ihrer Heimatinstitution beraten. Es sollten alle möglichen Schritte unternommen werden, um die Exposition gegenüber ionisierender Strahlung zu minimieren.
- Bei männlichen athymischen Nacktmäusen implantieren subkutan 5 x 106 Lymphknotenkarzinomzellen des Prostatakrebses (LNCaP) und lassen diese zu einem 100-150 mm3 Xenotransplantat anwachsen (3-4 Wochen nach der Inokulation).
- Verdünnen Sie das Radioimmunkonjugat 89Zr-DFO-J591 auf eine Konzentration von 1,0 mCi/ml in 0,9 % steriler Kochsalzlösung.
- Injizieren Sie 200 μl der 89Zr-DFO-J591 (DFO = Desferrioxamin, J591 = prostata-specific membrane antigen [PSMA] targeting-Antikörper) (200 μCi; 7,4 MBq) in die laterale Schwanzvene der Xenotransplantat-tragenden Mäuse.
- Zum gewünschten Zeitpunkt der Bildgebung (z. B. 12, 24, 48, 72, 96 oder 120 Stunden nach der Injektion) betäuben Sie die Maus mit einem 2%igen Isofluran-Sauerstoff-Gasgemisch.
- Platzieren Sie die Maus auf dem Bett des PET-Scanners für Kleintiere und halten Sie die Narkose während des Scans mit einem 1%igen Isofluran-Sauerstoff-Gasgemisch aufrecht. Bevor Sie das Tier auf das Scannerbett legen, überprüfen Sie die Anästhesie mit der Zehenkneifmethode und tragen Sie eine Augensalbe auf die Augen der Maus auf, um ein Austrocknen während der Anästhesie zu verhindern.
- Erfassen Sie die PET-Daten für die Maus über einen statischen Scan mit mindestens 40 Millionen zusammenfallenden Ereignissen unter Verwendung eines Energiefensters von 350-700 keV und eines Koinzidenz-Timing-Fensters von 6 nsec.
- Lassen Sie die Maus nach Abschluss der Aufnahme des Bildes nicht unbeaufsichtigt und legen Sie sie nicht mit anderen Mäusen in einen Käfig, bis sie wieder zu Bewusstsein gekommen ist.
