Ein Immunfluoreszenz-Assay zum Nachweis von Alpha-Synuclein-Aggregaten in einem Hautbiopsieschnitt

Zusammenfassung

Quelle: Vacchi, E., et al. Targeting von Alpha-Synuclein-Aggregaten in kutanen peripheren Nervenfasern durch freischwebenden Immunfluoreszenz-Assay. J. Vis. (2019).

Dieses Video zeigt einen Immunfluoreszenz-Assay zum Nachweis von neurodegenerativen krankheitsspezifischen Alpha-Synuclein-Aggregaten in Hautbiopsieschnitten. Die frei schwebende Immunfärbung wird eingesetzt, um die Carboxyl-terminale Hydrolase und die alpha-Synuclein-Aggregate in den dermalen Neuronen fluoreszierend zu markieren. Unter einem konfokalen Mikroskop zeigen Zellen mit Fluoreszenz beider Antikörper das Vorhandensein von Alpha-Synuclein-Aggregaten in den dermalen Neuronen an.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt,

>1. Entnahme von Hautbiopsien

1. Lassen Sie die Hautbiopsie von einem qualifizierten Arzt in einer geeigneten klinischen Umgebung durchführen.
2. Wählen Sie den Bereich aus, in dem die Hautbiopsie durchgeführt werden soll, und reinigen Sie ihn mit einem Alkoholtupfer.
3. Bereiten Sie die Anästhesielösung mit 1 ml Lidocain 2% vor.
4. Injizieren Sie mit der Nadel parallel zum Bereich eine Lokalanästhesie subkutan
.
5. Nachdem Sie die Wirkung der Anästhesie überprüf....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
5G4 (gegen den Menschen αSyneclein 5G4)	Analytik Jena Roboscreen	Artikel-Nr.: 847-0102004001	Maus monoklonal
AlexaFluor 488 Ziege anti Kaninchen IgG	Invitrogen	1971418	2mg/ml
AlexaFluor 594 Ziege anti Maus IgG	Invitrogen	1922849	2mg/ml
Dinatriumhydrogenphosphat-Lösung	Merk Millipore	106586
Ethylenglykol	Sigma-Aldrich	324558
Glycerin	Sigma-Aldrich	Nr. G7757
L-Lysin-Monohydrochlorid	Sigma-Aldrich	Nr. L5626
Paraformaldehyd	Aldrich Chemie	441244
PGP9.5	Abcam (Englisch	Artikel-Nr.: AB15503	Kaninchen polyklonal
Natriumchlorid	Sigma	Nr. S3014
Natriumdihydrogenphosphat-Monohydrat	Merck Millipore	106346
Natrium(meta)periodat	Sigma-Aldrich	Nr. S1878
Trizma Basis	Sigma	Nr. T1503
Tryton X-100	Sigma-Aldrich	X100
Vectashield	Vector Laboratorien	H-1000	Einbettmedium

)