Method Article

Eine Peptid-Microarray-Technologie zur Erstellung von Spezifitätsprofilen von Antikörpern

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Cornett, E. M., et al. Analyse der Histon-Antikörperspezifität mit Peptid-Microarrays. J. Vis. Exp. (2017).

Dieses Video demonstriert eine Technik, die die Peptid-Microarray-Technologie anwendet, um die Spezifität von Antikörpern zu profilieren, die posttranslationale Modifikationen (PTMs) auf Histonpeptiden erkennen. Ein Microarray-Objektträger, der immobilisierte Fluorophor-konjugierte Histonpeptide mit bekannten PTM-Kombinationen enthält, wird mit Ziel-PTM-spezifischen Antikörpern behandelt. Dieser Prozess hilft dabei, die Spezifität des Antikörpers für das Ziel und seine potenzielle Kreuzreaktivität mit Nicht-Ziel-PTMs zu identifizieren.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Entwerfen der Array-Folie und des Layouts der Quellplatte

  1. Klicken Sie unter der Überschrift "Planen eines Folienlayouts" auf der ArrayNinja-Benutzeroberfläche auf den Link, der dem verwendeten Microarray-Drucker entspricht.
    Anmerkung: ArrayNinja wurde so programmiert, dass es die Roboterbewegung von zwei häufig verwendeten Microarray-Druckern nachahmt (siehe Tabelle 1). Die Kompatibilität mit den anderen Arrayern kann auf Anfrage konfiguriert werden.
  2. Klicken Sie in das Dialogfeld "Lastplatte", geben Sie "empty" ein und klicken Sie auf "Enter". In Abbildung 1 sehen Sie einen Screenshot de....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Abbildung 1: ArrayNinja Design Modul. Ein Screenshot des ArrayNinja-Designmoduls wird in der gestrichelten Linie angezeigt. Auf dem Bedienfeld (oben) werden alle Parameter angezeigt, die am Microarray-Drucker geändert werden können. Wenn diese Parameter angepasst werden, wird das Cartoon-Bild des Folienlayouts (unten links) in Echtzeit aktualisiert. Nachdem das Layout festgelegt wurde, kann der Be.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Puffer druckenArrayItPpb
BsaOmnipure2390
Streptavidin-beschichtete Glas-ObjektträgerGreiner Bio-oneArtikel-Nr.: 439003-25
384-Well-Platte aus PolypropylenGreiner Bio-one784201
Biotin-FluoresceinSigmaArtikel-Nr.: 53608
Microarray-Drucker kontaktierenAushonArtikel-Nr.: 2470Aushon 2470 Microarray-Drucker
Microarray-Drucker kontaktierenGenmaschinenOmniGrid 100OmniGrid Microarray-Drucker
PbsInvitrogenArtikel-Nr.: 14190
Blockieren des PuffersArrayItSBB
Hydrophober WachsstiftVektor-LaboreH-4000ImmEdge Hydrophober Barriere-PAP-Stift
Silikon-DichtungGrace Bio-Labore622511
Hybridisierungs-GefäßThermo Scientific267061oder ein ähnliches Schiff
Fluoreszenzfarbstoff-konjugierter SekundärantikörperLebenstechnologienNr. A-21244Alexa Fluor 647 (Anti-Kaninchen)
Fluoreszenzfarbstoff-konjugierter SekundärantikörperLebenstechnologienNr. A-21235Alexa Fluor 647 (Anti-Maus)
Wachs-ImprinterArrayItMSI48
Tween-20Omnipure9490
Microarray-ScannerInnopsienInnoScan 1100ALoder gleichwertiger Microarray-Scanner
EipTitan Histon-Peptid-MicroarrayEpicypher112001
AbSurance Pro Histon-Peptid-MicroarrayMilliporeArtikel-Nr.: 16668
MODifiziertes Histon-Peptid-ArrayAktives MotivNr. 13001
Histon-Code-Peptid-MicroarraysJPTHis_MA_01
WachsKönigliche EicheGulfWaxfür Wachsimprinter
Befeuchtete Microarray-Objektträger-HybridisierungskammerVWRTel.: 97000-284
Waschkammer für Objektträger mit hohem DurchsatzArrayItHTW
Zentrifuge für ObjektträgerVWR93000-204
Antikörper 1Abcam (Englisch8898
Antikörper 2MilliporeTel.: 07-473
Biotinyliertes HistonpeptidEpiCypherNr. 12-2001Beispiel Peptid. Ähnliche Peptide mit verschiedenen Modifikationen sind aus verschiedenen kommerziellen Quellen erhältlich.
ImageMagickhttps://www.imagemagick.org/script/index.php
ArrayNinjahttps://rothbartlab.vai.org/tools/
kg ) kg

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

Related Articles