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Eine Multiplex-Immunfärbemethode unter Verwendung von Primärantikörpern derselben Wirtsspezies

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Lyu, Q., et al. Mikrowelle und Fluorophor-Tyramid für die Multiplex-Immunfärbung an Nebennieren von Mäusen − unter Verwendung von unkonjugierten Primärantikörpern der gleichen Wirtsspezies. J. Vis. Exp. (2020).

Dieses Video zeigt einen Assay zur Durchführung von Multiplex-Immunfärbungen mit primären Antikörpern derselben Wirtsspezies. Bei dieser Methode wird ein Abschnitt aus Nebennierengewebe einem zweistufigen Immunfärbeprozess unterzogen. Zunächst wird der Schnitt mit Antikörpern gefärbt, die spezifisch für Marker in der Hirnrinde sind, gefolgt von der Abstreifung des gebundenen Antikörpers und der erneuten Färbung mit Antikörpern, die für Marker in der Medulla spezifisch sind.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Färbung mit dem ersten Antikörper

  1. Entwachsung und Rehydrierung von formalinfixierten, paraffineingebetteten (FFPE) Objektträgern mit 5 Minuten für jeden der folgenden Schritte: Xylol oder gleichwertige Reagenzien 3x, 100 % Ethanol 2x, 95 % Ethanol 1x, 70 % Ethanol 1x, 50 % Ethanol 1x und destilliertes Wasser 2x.
    Anmerkung: Die Objektträger sollten ab diesem Rehydrationsschritt bis zur Montage im letzten Schritt feucht bleiben.
  2. Für eine optionale Ant....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Antifade-EindeckmediumVector LaboratorienH-1000
Biotinylierter Esel Anti-MausJacksonImmunoTel.: 715-066-1511:500 Verdünnung
Biotinylierter Esel Anti-KaninchenJacksonImmunoTel.: 711-066-1521:500 Verdünnung
DAPIBioLegende4228012 μg/mL in destilliertem Wasser
Fluoreszenz-MikroskopEchoDrehung 4
Meerrettichperoxidase-konjugiertes StreptavidinJacksonImmunoTel.: 016-030-0841:1000 Verdünnung
Mikrowelle, 700WGeneral ElectricJEM3072DH1BB
Maus Anti-CYP2F2Santa CruzNr. SC-3745401:250 Verdünnung
Maus Anti-THSanta CruzNr. SC-252691:1000 Verdünnung
Normales EselserumJacksonImmunoTel.: 017-000-1212% Serum in PBST
Kaninchen Anti-20αHSDKerafast,EB40021:500 Verdünnung
Kaninchen Anti-3βHSDTransGenen,KO6071:250 Verdünnung
Kaninchen Anti-THNovusNB300-1091:1000 Verdünnung
Kaninchen Anti-β-CateninAbcam,Artikel-Nr.: ab325721:500 Verdünnung
Streptavidin-Meerrettich-Peroxidase (SA-HRP)JacksonImmunoTel.: 016-303-0841:1000 Verdünnung
TSA Cy3 TyramidPerkinElmerSAT704B001EA1:100 Verdünnung
TSA-Fluorescein-TyramidPerkinElmerSAT701001EA1:100 Verdünnung

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Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

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