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Quantitativer Multiplex-Bakteriennachweis mit Farbstoff-markierten magnetischen Mikrosphären

December 23rd, 2025

In This Article

Abstract

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Dieses Video demonstriert den quantitativen Multiplex-Bakteriennachweis mit carboxylierten magnetischen Polystyrol-Mikrosphären, die in unterschiedliche Sätze eingefärbt sind. Das Verfahren umfasst die Bildung von Kügelchen-Bakterien-Komplexen, die magnetische Trennung und die flussbasierte Analyse, die eine präzise und gleichzeitige Quantifizierung mehrerer Bakterien in derselben Reaktionsvertiefung ermöglicht.

Protocol

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1. Kovalente Kopplung von Capture-Antikörpern an MagPlex-Mikrosphären

Jeder Einfangantikörper wird mit einem zweistufigen Verfahren wie unten beschrieben an ein spezifisches carboxyliertes magnetisches Mikrosphären-Set konjugiert.

HINWEIS: Ein Kupplungskit mit allen Reagenzien, Puffern und Materialien, die für die Mikrosphärenkopplung erforderlich sind, ist ebenfalls erhältlich (siehe MATERIALTABELLE).

  1. Resuspendieren Sie die serienmäßige entkoppelte Mikrosphärensuspension gemäß den Anweisungen im Produktinformationsblatt, das Ihren Mikrosphären beili....

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Results

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Abbildung 1: Arbeitsablauf für Multiplex-Capture-Sandwich-Immunoassays. Eine Multiplexmischung aus Antikörper-gekoppelten Mikrosphären wird in jede Vertiefung gegeben und die Probe wird hinzugefügt. Nach einer 1-stündigen Inkubation werden die Reaktionen gewaschen und die biotinylierten Nachweisantikörper hinzugefügt. Nach einer 1-stündigen Inkubation werden die Reaktionen erneut .......

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
MagPlex® MikrosphärenLuminex®MC100xx-YYEinzelne Katalognummern (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order) finden Sie auf der Website
1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen Eppendorf™22431081Eiweiß LoBind®
0,1 M monobasisches Natriumphosphat (NaH2PO4), pH 6,2MilliporeSigma Nr. S3139Aktivierungs-Puffer
1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimidhydrochlorid (EDC)Thermo Scientific™ Pierce™ 77149
N-Hydroxysulfosuccinimid (Sulfo-NHS)Thermo Scientific ™Durchstechen™ 24510
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS), pH 7,4MilliporeSigmaNr. P3813Kupplung Puffer
xMAP® Antikörper-KopplungskitLuminex®Tel.: 40-50016Optionales Kit für die Mikrosphärenkopplung erhältlich.
Anti-Escherichia coli O157:H7 AntikörperSeraCareArtikel-Nr.: 5310-0326Polyklonal, wird sowohl für die Erfassung als auch für die Detektion verwendet
Anti-Salmonella CSA-Plus AntikörperSeraCareArtikel-Nr.: 5310-0321Polyklonal, wird sowohl für die Erfassung als auch für die Detektion verwendet
Anti-Campylobacter spp. AntikörperSeraCareArtikel-Nr.: 5310-0324Polyklonal, wird sowohl für die Erfassung als auch für die Detektion verwendet
Anti-Listeria-Antikörper SeraCareTel.: 5310-0319Polyklonal, gattungsspezifisch, sowohl für den Fang als auch für den Nachweis
PBS, pH 7,4 mit 0,02 % Tween-20, 0,1 % BSA, 0,05 % Natriumazid (PBS-TBN) MilliporeSigmaP3563
A7888
Nr. S8032		Bis zu 1% BSA kann verwendet werden
Anti-Escherichia coli O157:H7 AntikörperSeraCareArtikel-Nr.: 5310-0326Polyklonal
(EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotin) (Pierce).Thermo Scientific™Nr. A39257
E. coli O157:H7SeraCareArtikel-Nr.: 5370-0013Hitzeabgetötet
Salmonellen
Serotyp Typhimurium		SeraCareArtikel-Nr.: 5370-0002Hitzeabgetötet
Campylobacter jejuniSeraCareArtikel-Nr.: 5370-0011Hitzeabgetötet
Listerien MonozytogeneSeraCareArtikel-Nr.: 5370-0010Hitzeabgetötet
Streptavidin, R-Phycoerythrin-Konjugat (SAPE)Thermo Scientific™Nr. S866

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Magnetic MicrospheresBacterial DetectionFlow Based AnalysisAntibody ConjugationMagnetic SeparationMultiplexed QuantificationFluorescent ReporterStreptavidin BindingBead Bacteria ComplexesSpectral Signatures

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