Erzeugung der weit verbreiteten zerebralen kortikalen Demyelinisierung in einem Rattenmodell

Zusammenfassung

Quelle: Üçal, M. et al., Rattenmodell der weit verbreiteten zerebralen kortikalen Demyelinisierung, die durch eine intrazerebrale Injektion von proinflammatorischen Zytokinen induziert wird. J. Vis. Exp. (2021)

Das Video demonstriert eine Methode zur Generierung eines Rattenmodells mit weit verbreiteter zerebraler kortikaler Demyelinisierung. Dabei wird die Blut-Hirn-Schranke gestört, indem proinflammatorische Zytokine in Mäuse injiziert werden, die mit rekombinantem Myelinscheidenprotein geprimt sind. Dieser Prozess erleichtert die Infiltration von Immunzellen, was zu einer weit verbreiteten Demyelinisierung der Großhirnrinde führt.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Materialvorbereitung

HINWEIS: Die Operation wird unter aseptischen Bedingungen durchgeführt. Vergewissern Sie sich vor dem Start, dass alle chirurgischen Instrumente, einschließlich der Bohrer, mit einem geeigneten Desinfektionsmittel gereinigt werden.

1. Bereiten Sie eine Anästhesiemischung vor: 0,02 mg/ml Fentanyl, 0,4 mg/ml Midazolam und 0,2 mg/ml Medetomidin (Endkonzentrationen in der Mischung).
   

Ergebnisse

Abbildung 1: Vorbereitung des Katheters. (A und B) Die Führungskanüle und die Dummy-Kanüle (Katheterkappe mit Inlet) werden zusammengebaut und verschraubt. (C) Anschließend wird der Katheter mit Hilfe eines Skalpells auf eine Größe von 2 mm geschnitten. Die mikroskopische Beobachtung zeigte, dass die Verwendung einer Schere zu diesem Zweck die kre.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Erwachsene männliche Dark Agouti Ratten (300 ±25 g)
Fentanyl	Hameln pharma plus, Deutschland		Als Fentanyl-Citrat, 50 μg/ml
Midazolam	ERWO Pharma, Österreich	50039017	5 mg/ml
Medetomidin	Orion Pharma, Finnland		Als Medetomidinhydrochlorid, 1mg/ml
Flumazenil	Roche, Schweiz		0,1 mg/ml
Atipamezol	Orion Pharma, Finnland		Als Atipamezolhydrochlorid, 5 mg/ml
10% Povidon-Jod-Komplex	Mundipharma, Österreich
Zahnzement	Heraeus Kulzer, Deutschland	Tel.: 6603 7633
Physiologische Kochsalzlösung	Fresenius Kabi, Österreich		0,9 % NaCl
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)	Sigma-Aldrich, Deutschland	Nr. P3813
Isofluoran	AbbVie, Österreich
Befeuchtende Augentropfen	Thea Pharma, Österreich
70% EtOH	Merck, Deutschland	1070172511	Absolutes Ethanol wurde in ddH2O verdünnt, um es zu 70 % v/v
2,5 % Enrofloxacin	Bayer, Deutschland		Prophylaktische Antibiotika
Carprofen	Pfizer, Vereinigte Staaten von Amerika		Schmerzmittel, 50 mg/ml
Tween-20	Sigma-Aldrich, Deutschland	Nr. P9416
Pentobarbital	Richter Pharma, Österreich		Pentobarbital-Natrium, 400 mg/ml
Interferon-Gamma	PeproTech, Vereinigte Staaten von Amerika	400-20
Tumornekrosefaktor alfa	F&E-Systeme, USA	510-RT-050/CF
rMOG1-125	eigenes Produkt am Zentrum für Molekulare Medizin, Karolinska Institut, Schweden		Rekombinantes Rattenmyelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein, Aminosäuren 1-125 aus dem N-Terminus, auch kommerziell erhältlich: AnaSpec, AS-55152-500, USA
Unvollständiges Freund-Adjuvans	Sigma-Aldrich, Deutschland	Nr. F5506
Rinderserumalbumin	Sigma-Aldrich, Deutschland	Nr. A9576
Peroxidase-Substrat-Lösung	Vector Laboratories, USA	SK-45000
Stereotaktischer Rahmen	David Kopf Instruments, USA
Katheter, MRT-geeignet	PlasticsOne, Vereinigte Staaten von Amerika	8IC315GPKXXC
Dummy-Kanülen	PlasticsOne, Vereinigte Staaten von Amerika	8IC315DCNSPC
Kunststoffschrauben, MRT-geeignet	PlasticsOne, Vereinigte Staaten von Amerika	8L080X093N01
Konnektor-Kanüle	PlasticsOne, Vereinigte Staaten von Amerika	8IC313CXSPCC
Schraubendreher mit 2 mm Spitzenweite
Bohrer mit flexibler Schaftverlängerung	Proxxon, Deutschland	NR. 28 472, NR. 28 706, NR. 28 620,
Bohrer, rund, 0,5 mm	Hager & Meisinger, Deutschland	REF310 104 001 001 009
Bohrer, gedreht, 1,3 mm	Hager & Meisinger, Deutschland	REF350 104 417 364 013
Skalpell	Braun, Deutschland	BB510
Skalpell-Griff	Fine Science Tools, Deutschland	Artikel-Nr.: 91003-12
Applikator mit Wattestäbchen	Henry Schein Medical, Österreich	900-3155
Chirurgische Schere	Fine Science Tools, Deutschland	14101-14, 14088-10
Chirurgische Zange	Fine Science Tools, Deutschland	Nr. 11002-12, 11251-35
Bulldog-Klemmen	Fine Science Tools, Deutschland	Nr. 18050-35
Homöotherme Decke	TSE-Systeme, Deutschland
Infrarot-Lampe	Beurer, Deutschland	616,51
Zahnhärtendes Licht	Guilin Woodpecker Medical, China
Resorbierbares Nahtmaterial	Johnson & Johnson, Belgien	V792E
Programmierbare Spritzenpumpe	World Precision Instruments, USA	AL-1000
Untersuchungshandschuhe
OP-Kittel
Elektrorasierer	Aesculap, Deutschland	GT420
Verdampfer für flüchtige Anästhetika	Rothacher Medical, Schweiz	CV 30-301-D
Sauerstoffquelle für flüchtige Anästhesieverdampfer	Air Liquide, Österreich	19.113
Flüchtige Anästhesiekammer	Rothacher Medical, Schweiz	Nr. PS-0347
Anästhesiemaske für Ratten	Rothacher Medical, Schweiz	PS-0307-A
1 ml Spritze	Codan, Dänemark	REF 62.1612
26 Gauge Nadel für die Injektion	Braun, Deutschland	4657683
20 Gauge Nadel für Zytokininjektion und Immunisierung	Braun, Deutschland	4657519
Glasspritzen mit Luer-Lock-Spitze	Poulten & Graf, Deutschland	7.140-37
3-Wege-Absperrhahn	Becton Dickinson, Schweden	Artikel-Nr.: 394600
37°C Inkubator	Kendro, Deutschland	50042301
Mikropipetten	Gilson, Vereinigte Staaten von Amerika	F167350