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Konstruktion eines humanisierten Mausmodells mit künstlicher Immunität gegen HIV

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Zhen, A., et al. Stammzellbasierte hergestellte Immunität gegen HIV-Infektionen im humanisierten Mausmodell. J. Vis. Exp. (2016).

Das Video demonstriert eine Technik zur Generierung eines humanisierten Mausmodells mit stammzellbasierter künstlicher Immunität gegen das humane Immundefizienzvirus (HIV). Menschliches fötales Thymusgewebe und manipulierte hämatopoetische Stammzellen (HSCs) werden in die Nierenkapsel einer stark immungeschwächten Maus implantiert. Die HSCs, die chimäre Antigenrezeptoren (CARs) gegen HIV exprimieren, sind in eine gallertartige Proteinmischung gemischt, die ihre Co-Lokalisation mit dem Thymusgewebe fördert. Nach dem Eingriff differenzieren sich die HSCs in verschiedene humane Immunzellen, was zur Entwicklung eines humanisierten Mausmodells mit einem funktionsfähigen menschlichen Immunsystem gegen HIV führt.

Protocol

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Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt. Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom örtlichen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. Konstruktion von humanisierten Mäusen, die mit einem chimären CD4-Antigenrezeptor entwickelt wurden

  1. Aufbereitung des fetalen Thymus und Isolierung von CD34+ HSCs aus der fetalen Leber
    1. Verarbeitung von Thymus
      1. Waschen Sie den Thymus vorsichtig in pho....

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
CD34 Mikrobead-KitMiltenyiTel.: 130-046-702Zur Sortierung von humanen CD34+-Vorläuferzellen
BambankerWakoTel.: 302-14681zum Einfrieren von Zellen
QIAamp Virales RNA-KitQiagenArtikel-Nr.: 52904Zur Messung der Viruslast im Serum
MACSQuant DurchflusszytometerMiltenyiFür die Strömungsanalyse
BD LSRFortessa™BD BiowissenschaftenFür die Strömungsanalyse
HyaluronidaseSigmaH6254-500MGFür die Gewebeverdauung
Desoxyribonuklease IWorthingtonLS002006für die Gewebeverdauung
KollagenaseLebenstechnikArtikel-Nr.: 17104-019für die Gewebeverdauung
CFX Echtzeit-PCR-NachweissystemBioradZur Messung der Viruslast und der Genexpression
Mäuse, Stamm NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJDas Jackson-LaborArtikel-Nr.: 5557Für die Konstruktion der humanisierten Mäuse
Penicillin Streptomycin (Pen Streptomycin)Thermo Fisher Scientific10378016Zur Kultivierung von Zellen
Piperacillin/TazobactamPfizerZosynAntimykotikum
Amphotericin B (Antimykotikum der Fungizone)Thermo Fisher ScientificArtikel-Nr.: 15290-018Antimykotikum
AUTOCLIP Wundklammern, 9 mm - 1000 StückBecton Dickinson427631Für die Chirurgie
Sterile polyverstärkte Aurora-OP-Kittel, 30 pro KartonMedlineDYNJP2707Für die Chirurgie
Nähte, 4-0, vicrylOwens und MinorArtikel-Nr.: 23000J304HFür die Chirurgie
Alkohol-VorbereitungspadsOwens und Minor3583006818Für die Chirurgie
Handschuhe, chirurgisch, 6 1/2Owens und Minor4075711102Für die Chirurgie
Yssel's serumfreies T-Zell-MediumGemini Bio-ProdukteNr. 400-102Für die CD34+-Zelltransduktion
Humanes SerumalbuminSigma-AldrichNr. A9511Für die CD34+-Zelltransduktion

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Humanized Mouse ModelEngineered ImmunityHIV InfectionHematopoietic Stem CellsChimeric Antigen ReceptorsFetal Thymus TissueRetro orbital InjectionKidney Capsule ImplantationGelatinous Protein MatrixHuman Immune System

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