Orale Verabreichung von transformierten Hefezellen in das intestinale Immunsystem der Maus

Zusammenfassung

Quelle: Hudson, L. E. et al., Transformation von probiotischen Hefen und ihre Erholung aus gastrointestinalem Immungewebe nach oraler Sonde bei Mäusen.J. Vis. Exp. (2016)

Dieses Video zeigt die orale Verabreichung von transformierten Hefezellen in ein Mausmodell. Die transformierten Hefezellen werden oral mit einer Sondentechnik in den Magen der Maus verabreicht. Später wandern die Zellen in den Dünndarm, wo sie von mikrogefalteten Zellen umhüllt werden und ihren Transfer in Peyer-Pflaster erleichtern und Zugang zum Darmimmunsystem erhalten.

Protokoll

Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

>1. UV-Mutagenese zur Erzeugung auxotropher Hefestämme

1. Erstellung von Überlebenskurven zur Bestimmung der benötigten Dosen von ultravioletter (UV) Strahlung
   1. Bereiten Sie YPD-Medien (Hefeextrakt, Pepton, Dextrose) und andere in Tabelle 1 aufgeführte Reagenzien gemäß den Standardverfahren vor und inokulieren Sie einzelne Kolonien in 5-10 ml YPD-Medien. Inkubieren Sie die Kulturen auf einer Walzentrommel bei 30 °C O/N mindestens 8 ....

Ergebnisse

Abbildung 1. Hefekolonien, die auf YPD-Medien gezüchtet wurden. Beispiel für eine YPD-Platte, die lebensfähige koloniebildende Einheiten (KBE) von probiotischer Hefe nach UV-Bestrahlung zeigt. Die Zellen wurden seriell verdünnt, so dass einzelne KBE unterschieden und gezählt werden können.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
SmartSpec 3000 Spektralphotometer	BioRad	Nr. 170-2501	Beispiel eines Spektralphotometers zur Bestimmung der Zellkonzentration und OD600 von Hefekulturen
New Brunswick Walzentrommel	Eppendorf	M1053-4004	Beispiel einer Walzentrommel für die Inkubation von Hefekulturen
UV-Stratalinker 2400	Stratagene	Artikel-Nr.: 400075-03	Beispiel Stratalinker
Stuart Colony Counter SC6PLUS	11983044	Fisher Scientific	Plattenständer mit Vergrößerung zeichnet die Anzahl der Kolonien auf, wenn der Druck des Stifts wahrgenommen
Scienceware Kolonie-Zähler	F378620002	Bel-Art Scienceware	Tragbarer Kolonie-Gegenstift
Replik-Beschichtungsgerät	Fisherbrand	Tel.: 09-718-1	Beispiel für einen Replik-Beschichtungsständer und Pads
Samt-Quadrate	Fisherbrand	Tel.: 09-718-2
L-förmige sterile Zellspreader	Fisherbrand	14665230
Desoxyribonukleinsäure, einzelsträngig aus den Hoden des Lachses	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: D7656-1ML	Beispiel für Träger-DNA für die LiOAc-Transformation von Hefe
Sondennadeln	Braintree Wissenschaftlich	N-PK 002	Für Mäuse mit einem Gewicht von 15-20 g ist die empfohlene Nadel eine 22 Gauge (1,25 mm Kugel), 1 in langer, gerader, wiederverwendbarer Sondennadel. Für Mäuse mit einem Gewicht von mehr als 20 g können gerade oder gebogene Sondennadeln mit einem Gewicht von 20 Gauge oder mehr verwendet werden
1 ml sterile Einweg-Tuberkulinspritze mit Aufsteckverschluss	Becton Dickinson	BD 309659
Stumpfe Pinzetten wie z.B. Electron Microscopy Sciences 7" (178 mm) gezackte Spitze, Pinzetten mit breitem Griff	Elektronenmikroskopie	Artikel-Nr.: 77937-28	Beispiel für eine stumpfe Pinzette, die für die Dissektion benötigt wird
Gerade und gebogene Präparierschere	Elektronenmikroskopie	72966-02 und 72966-03	Beispiele für Scheren, die zum Sezieren benötigt werden

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