Ein In-vitro-Assay zum Screening von Interferonen als potente Inhibitoren des Zika-Viruswachstums

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Contreras, D. et al., Zika-Virus Infektiöses Zellkultursystem und die prophylaktische Wirkung von Interferonen in vitro. J. Vis. Exp. (2016)

Das Video zeigt einen in vitro Assay zum Screening von Interferonen mit antiviraler Aktivität gegen das Zika-Virus, einen menschlichen Krankheitserreger. Innerhalb der Wirtszelle vermehrt sich das Zika-Virus bei der Internalisierung, infiziert benachbarte Zellen und bildet unterschiedliche Zonen oder virale Plaques. Typ-I-Interferon, das als antivirales Mittel wirkt, hemmt die Virusvermehrung und verhindert so die Bildung von viralen Plaques in der Monoschicht der Wirtszelle.

Protokoll

>1. Screening der Zytokinbibliothek gegen Zika-Virus-Infektionen

Züchten Sie naive Vero-Zellen in einer Menge von 1 x 10⁵ Zellen pro Well mit einer 12-Well-Platte. Sobald die Zellen befestigt sind (6 Stunden nach der Aussaat), fügen Sie jedes Zytokin bei
angegebene Konzentrationen in biologischen Duplikaten (2 ml Volumen/Well). Inklusive Fahrzeugsteuerung (PBS).
12 Stunden nach der Behandlung ist eine Zika-Virusinfektion durchzuführen (MOI von 0,1 in 400 μl pro Well). Negative Kontrollvertiefungen ohne Infektion einschließen (Mock).
Ersetzen Sie das virale Inokulum 4 Stunden nach der Infektion durch ein mit Zytokin behandeltes Medium (2 ml). Inkubieren Sie die Zellen bei 37 °C für weitere 44 Stunden.
48 Stunden nach der Infektion werden virale Plaques mit einem Phasenkontrastmikroskop gezählt und repräsentative Bilder infizierter Zellen bei 40-facher Vergrößerung aufgenommen (Abbildung 1).

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Interferone zeigen eine starke Anti-Zika-Virusaktivität. (A) Das Diagramm zeigt die Modulation des Zika-Viruswachstums durch verschiedene Zytokine im Vergleich zu dem der Vehikelkontrolle. Mittelwerte und Standardabweichung werden im Balkendiagramm angezeigt. Interferone zeigten eine statistisch signifikante Hemmung der Zika-Virus-Replikation (p-Wert ...