Differenzierung menschlicher neuronaler Stammzellen in 3D-Kultur mit Hilfe eines porösen Gerüsts

Abstract

Quelle: Stevanato, L. et al., Differenzierung einer humanen neuralen Stammzelllinie auf dreidimensionalen Kulturen, Analyse von microRNA und mutmaßlichen Zielgenen. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt die Entwicklung und Differenzierung menschlicher neuronaler Stammzellen innerhalb eines dreidimensionalen Gerüsts. Eine Lamininbeschichtung auf dem Gerüst fördert die Zelladhäsion, während ein wachstumsfaktorfreies neuronales Medium die Zelldifferenzierung in neurale Vorläuferzellen induziert, die ihre Prozesse innerhalb einer porösen Architektur in mehrere Richtungen ausdehnen und eine dreidimensionale Kultur bilden

Protocol

>1. HNSC-Differenzierung zur dreidimensionalen (3D) Kultur

HINWEIS: Isolierung und Ableitung menschlicher neuraler Stammzellen (hNSCs) aus einem ethisch zugelassenen Gewebe, das in einer früheren Veröffentlichung beschrieben wurde. Bitte befolgen Sie die ethischen und institutionellen Richtlinien, während Sie dieses Verfahren befolgen.

1. 3D-Kultur mit 12-Well-Platte
   1. Verwenden Sie während des gesamten Eingriffs eine aseptische Technik. In einer biologischen Sicherheitswerkbank rehydrieren Sie Gerüste, indem Sie 2 ml/Vertiefung 70%iges Ethanol hinzufügen, das mit Wasser für die Bewässerun....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM:F12	Invitrogen	Artikel-Nr.: 21331-020	Für die Vorbereitung von RMM-Medien
Humanalbumin-Lösung	Baxter Gesundheitsversorgung begrenzt	1501052	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 0,03 % verwendet wird
Transferrin, humane rekombinante	Sigma	Nr. T8158	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 5 μg/ml verwendet wird
Putrescine DiHCl	Sigma	Nr. 5780	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 16,2 μg/ml verwendet wird
Insulin, humane rekombinante	Sigma	Nr. I9278	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 5 μg/ml verwendet wird
Progesteron	Sigma	Nr. P6149	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 60 ng/ml verwendet wird
L-Glutamin	Invitrogen	Nr. 25030-24	Für RMM-Medium, das bei einer Endkonzentration von 2 mM verwendet wird
Natriumselenit	Sigma	Nr. S9133	Für RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 40 ng/ml verwendet wird
bFGF	Peprotech	AF-100-15	Zur Zugabe zu RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 10 ng/ml verwendet
EGF	Peprotech	Nr. AF-100-188	Zur Zugabe zu RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 20 ng/ml verwendet
4-OHT	Sigma	Nr. H7904	Zur Zugabe zu RMM-Medium, das in einer Endkonzentration von 100 nM verwendet
Laminin	AMS Biotechnologie	Artikel-Nr.: 3400-010-10
Wasser für die Bewässerung	Baxter Gesundheitswesen	UKF7114
Alvetex 12-Well-Platte	Reinnervate GmbH	AVP002
Ethanol	Merck	1.00986.1000