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Erzeugung neuromuskulärer Verbindungen mit einem mikrofluidischen Gerät

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Stoklund Dittlau, K. et al., Generation of Human Motor Units with Functional Neuromuscular Junctions in Microfluidic Devices.J. Vis. Exp. (2021)

Das Video zeigt die Bildung von neuromuskulären Verbindungen mit Hilfe eines mikrofluidischen Geräts. Neuronale Vorläuferzellen und Muskelvorläuferzellen werden in verschiedene Vertiefungen innerhalb des Geräts ausgesät und zu Motoneuronen bzw. Myotuben reifen gelassen. Die Bildung eines Volumens und eines chemischen Gradienten führt zur Entwicklung aktiver neuromuskulärer Verbindungen.

Protocol

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Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

Alle Reagenzien und Geräte, die in diesem Protokoll verwendet werden, sind in der Materialtabelle aufgeführt und sollten steril verwendet werden. Das Medium sollte vor der Verwendung auf Raumtemperatur (RT) erhitzt werden, sofern nicht anders angegeben. Einen Überblick über das Co-Kultur-Protokoll finden Sie in Abbildung 1.

1. Differenzierung von Motoneuronen-Vorläuferzellen von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs)

  1. ....

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Results

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Abbildung 1: Schematische Übersicht über das Motoreinheitenprotokoll in mikrofluidischen Geräten.Zeitleiste der Differenzierung und Überblick über die Co-Kultur von Tag 0 bis Tag 28 gemäß der Zeitleiste des Differenzierungsprotokolls für Motoneuronen. Die Differenzierung von Motoneuronen aus iPSCs wird am Tag 0 eingeleitet und wie zuvor beschrieben für die folgenden 10 Tage durchgeführt. Am 9. Tag.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
EssigsäureCHEM-Lab NVArtikel-Nr.: 00.0116.1000Komponente der Beschichtung. H226, H314. Nr. P280
Agrin (rekombinantes humanes Protein)F&E-SystemeArtikel-Nr.: 6624-AG-050Beilage Medien
AscorbinsäureSigmaNr. A4403Medienkomponente
βIII-Tubulin (Tubulin)Abcam (EnglischAB7751Antikörper (1:500)
β-MercaptoethanolThermo Fisher Scientific31350010Medien-Komponente. Nr. H317. P280.
B-27 ohne Vitamin AThermo Fisher ScientificArtikel-Nr.: 12587-010Medienkomponente
BDNF (vom Gehirn abgeleiteter neurotropher Faktor)Peprotech450-02BWachstumsfaktor
bFGF (rekombinanter humaner basischer Fibroblasten-Wachstumsfaktor)Peprotech100-18 Mrd.Wachstumsfaktor
Kollagen aus KalbslederThermo Fisher Scientific17104019Beschichtungskomponente
CNTF (ziliärer neurotropher Faktor)Peprotech450-13BWachstumsfaktor
DAPTTocris BiowissenschaftenNr. 2634Beilage Medien
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific11330032Medienkomponente
DmsoSigmaD2650-100MLKryokonservierungs-Komponente. H315, H319, H335. P280.
Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS)Thermo Fisher Scientific14190250kein Kalzium, kein Magnesium
EthanolVWRArtikel-Nr.: 20.821.296Sterilisation. Nr. H225. Nr. P280
Fötales RinderserumThermo Fisher Scientific10270106Medienkomponente
Fluoreszenz-EindeckmediumDakoNr. S3023Komponente Immunzytochemie
GDNF (Neurotropher Faktor, der von Gliazelllinien abgeleitet ist)Peprotech450-10BWachstumsfaktor
Pferde-SerumThermo Fisher Scientific16050122Medienkomponente
IMDMThermo Fisher Scientific12440053Medienkomponente
Insulintransferrin SelenThermo Fisher Scientific41400045Medienkomponente
Knockout-Serum-ErsatzThermo Fisher ScientificTel.: 10828-028Kryokonservierungskomponente
Laminin aus der Basalmembran des Maussarkoms Engelbreth-Holm-SwarmSigmaL2020-1MGErgänzung zu Beschichtungskomponenten und -medien
L-GlutaminThermo Fisher ScientificArtikel-Nr.: 25030-024Medienkomponente
N-2 ErgänzungThermo Fisher ScientificArtikel-Nr.: 17502-048Medienkomponente
Neurobasales MediumThermo Fisher Scientific21103049Beschichtungs- und Medienkomponente
Nicht-essentielle AminosäurenThermo Fisher Scientific11140050Medienkomponente
Parafilm MSigmaNr. P7793-1EALagerung von Geräten
Penicillin/Streptomycin (5000 U/ml)Thermo Fisher Scientific15070063Medienkomponente
Petrischale (3 cm)Nunc153066Durchmesser: 3 cm
Petrischale (10 cm)Sarstedt833.902Durchmesser: 10 cm
Platte (6-Well)Cellstar Greiner bio-oneArtikel-Nr.: 657160Kulturplatte
Poly-L-Ornithin (PLO)SigmaNr. P3655-100MGBeschichtungskomponente
RetinsäureSigmaNr. R2625Beilage zu den Medien. H302, H315, H360FD, H410. P280.
Revita ZellergänzungsmittelThermo Fisher ScientificA2644501ROCK-Inhibitor-Lösung
Geglätteter AgonistMerch MilliporeArtikel-Nr.: 566660Beilage Medien
NatriumpyruvatLebenstechnologienArtikel-Nr.: 11360-070Medienkomponente
T75-KolbenSigmaCLS3276Kulturplatte
TrypLE expressThermo Fisher Scientific12605010MAB-Dissoziationslösung
Tubocyrarinhydrochlorid PentahydratSigmaT2379-100GAcetylcholinrezeptor-Blocker. Nr. H301. P280.
XonaChips vormontiertes mikrofluidisches GerätXona MikrofluidikXC150Länge der Mikronut: 150 μm
) kg

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