Erzeugung von primären retinalen Ganglienzellkulturen aus Zebrafischembryonen

Zusammenfassung

Quelle: Terzi, A., et al., ROS Live Cell Imaging during Neuronal Development. J. Vis. Exp. (2021)

Das Video demonstriert eine Methode zur Kultivierung primärer retinaler Ganglienzellen aus Zebrafischembryonen. Embryonen im Frühstadium werden dissektioniert, um die Augen zu isolieren, die anschließend mechanisch in eine Suspension aus retinalen Ganglienzellen dissoziiert werden. Diese Zellsuspension wird auf Deckgläsern kultiviert, die mit Klebeproteinen beschichtet sind, um die Axonentwicklung zu erleichtern.

Protokoll

>1. Vorbereitung von Lösungen

1. E2 Medien (1x)
   1. Bereiten Sie 100x E2A (500 ml), 500x E2B (100 mL) und 500x E2C (100 mL) Lösungen vor, indem Sie alle in Tabelle 1 aufgeführten Komponenten kombinieren. Autoklavieren Sie E2A-, E2B- und E2C-Lösungen. Bei 4 °C lagern.
   2. Für 1x E2-Medien: Kombinieren Sie 5 ml 100x E2A, 1 ml 500x E2B und 1 ml 500x E2C. Bringen Sie das Volumen mit sterilem Wasser auf 500 ml. Stellen Sie den pH-Wert auf 7,0-7,5 ein.
   3. Bereiten Sie 50 ml-Aliquots von 1x E2-Medien vor und lagern Sie sie bei -20 °C für die Langzeitlagerung. Beim Auftauen kann es jedoch zu Niederschlägen komme....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
35-mm-Kulturschale	Sarstedt	Tel.: 83-3900
Calciumchlorid-Dihydrat	Fisher Scientific	Nr. C79-500
Deckglas	Corning	Nr. 2850-22
Einweg-Petrischalen (100 x 15 mm)	VWR	Artikel-Nr.: 25384-094
Fötales Rinderserum	ThermoFisher Scientific	26140087
Traubenzucker	Sigma Aldich	Nr. G7528
HEPES	Sigma Aldich	Nr. H4034
Laminin	ThermoFisher Scientific	Artikel-Nr.: 23017-015
Leibovitz's L-15 Medium ohne Phenolrot	Gibco/Fisher Scientific	Tel.: 21-083-027
Pbs	Hyclone/Fisher Scientific	SH3025601
Penicillin/Streptomycin	ThermoFisher Scientific	15140122
Poly-D-Lysin (PDL)	Sigma Aldich	Nr. 7280
Natriumpyruvat	Sigma Aldich	Nr. P5280
Steritop 0,22 μm Filter	Millipore	S2GPT05RE