Etablierung eines Hirntumors in einem organotypischen Scheiben-Co-Kulturmodell

Zusammenfassung

Quelle: Chadwick, E. J. et al. Ein Hirntumor/Organotypisches Scheiben-Co-Kultursystem zur Untersuchung der Tumormikroumgebung und gezielter medikamentöser Therapien. J. Vis. Exp. (2015).

Dieses Video zeigt die Entwicklung eines 3D-Co-Kultursystems. Hirnschnitte von Mäusen werden auf eine Membran gelegt, auf der fluoreszenzmarkierte menschliche Hirntumorzellen wachsen können. Sobald das System fertig ist, wird es für die Bildgebung gefärbt.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Plattieren der Scheiben auf die Einsätze

1. Füllen Sie jede Vertiefung einer 6-Well-Platte mit 1.200 μl Scheibenkulturmedien. Füllen Sie unbenutzte Wells mit 1.200 μl PBS und füllen Sie den Mittelraum der Platte mit 5 ml 1x PBS. Lagern Sie diese Platte bei 37 °C.
2. Platzieren Sie mit dem Schaumlöffelwerkzeug eine Gehirnscheibe in das Medium auf dem Einsatz und drücken Sie die Scheibe vorsichtig so, dass sie vollständig untergetaucht ist. Wiederholen Sie den Vorgang für alle Sch....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
HEPES	Invitrogen	17504044
Traubenzucker	Invitrogen	17502048
Pennicillin Streptomycin	Lebenstechnologien	Nr. 15140-122
HBSS	Lebenstechnologien	Artikel-Nr.: 14185-052
B-27	Lebenstechnologien	Artikel-Nr.: 17504-044
N2	Lebenstechnologien	Artikel-Nr.: 17502-048
Glutamax	Lebenstechnologien	35050061
Neurobasal-A- Medium minus Phenolrot	Invitrogen	12349015
Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt	Promega	Nr. V2111
Schnittkultur-Einsätze	Milipore	PICM0RG50
Laminin	Invitrogen	23017015
Cm-DiI	Invitrogen	Nr. V22888
Mikrosphären	Lebenstechnologien	Nr. F-21010