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Erzeugung und Pflege von Astrosphären mit humanen pluripotenten Stammzellen

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Cvetkovic, C., et al. Synaptische Mikroschaltkreismodellierung mit 3D-Kokulturen von Astrozyten und Neuronen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen. J. Vis. (2018).

Das Video zeigt eine Methode zur Erzeugung von Astrosphären aus Vorläuferzellen menschlicher pluripotenter Stammzellen. Dabei handelt es sich um das Wachstum und die Proliferation von Stammzellen mit Nährmedien, die Wachstumsfaktoren und Kinase-Inhibitoren enthalten. Diese Zellen aggregieren sich dann und differenzieren sich zu Astrozyten, die Astrosphären bilden.

Protocol

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>1. Zellkultur und Reagenzienvorbereitung

  1. Bereiten Sie beschichtete Platten für die Zellkultur vor.
    1. Verdünnen Sie die Beschichtungslösung mit extrazellulärer Matrix (ECM) mit DMEM/F12-Medien, um eine 1 mg/ml-Stammlösung herzustellen. Die verdünnte ECM-Stammlösung wird in 30 konische Röhrchen zu je 3 ml aliquotiert und sofort bei -20 °C gelagert. Um eine Arbeitslösung zu erhalten, resuspendieren Sie 3 mL ECM-Material in 33 mL vorgekühltes DMEM/F12-Medium, wodurch das Gesamtvolumen auf 36 mL für eine Konzentration von 80 μg/mL gebracht wird.
    2. Beschichten Sie 1 ml pro Vertiefung einer 6-Well-Zellkulturplatte mit ECM-Arbei....

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Results

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Abbildung 1: Schrittweise Darstellung der Differenzierung und Bildung von 3D-neuronalen Kugeln, die von hPSCs abgeleitet sind. (A) Zeitleiste der wichtigsten Schritte des Protokolls. (B) Reine Populationen von Nervenzellen können aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen (hPSCs) erzeugt werden. Zur Erzeugung von Astrozyten-Vorläuferzellen (gestrichelter grüner Kasten) siehe Schritt 2.1. (C.......

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
6-Well-PlatteFisher Scientific08-772-1B
15 ml konische RöhrchenOlympus KunststoffeNr. 28-101
AccutaseSigmaNr. A6964-100MLLösung für die Ablösung
AggreWell-PlatteStammzellen-TechnologienArtikel-Nr.: 34850
Anti-Adhärenz-SpüllösungStammzellen-Technologien7010Verhindern Sie die Adhäsion von Zellen an Mikrotiterplatten
Anti/AntiThermofischer15240062
Nr. B27Thermofischer17504044Medienbeilage
BrainPhys neuronales MediumStammzellen-Technologien5790Neurophysiologische Alternative zum Basalmedium
Kryostor CS10Stammzellen-Technologien7930Kryokonservierungsmedium mit 10% DMSO
DMEM/F12ThermofischerArtikel-Nr.: 10565-042Mit GlutaMAX Ergänzung
DMH-1Stammzellen-TechnologienArtikel-Nr.: 73634GEFAHR: Giftig beim Verschlucken. Arbeitskonzentration: 2 μm
Doxycyclinhydrochlorid (Dox)SigmaD3072-1mlGEFAHR: Giftig für Schwangere. Arbeitskonzentration: 2 μg/ml
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)PeprotechAF-100-15Arbeitskonzentration: 10 ng/mL
Fibroblasten-Wachstumsfaktor-2 (FGF)Peprotech100-18 Mrd.Arbeitskonzentration: 10 ng/mL
Hämazytometer oder automatischer ZellzählerLebenstechnologienAMQAX1000
Matrigel-Membran-MatrixCorningArtikel-Nr.: 354230ECM-Beschichtungslösung. Arbeitskonzentration: 80 μg/ml. Bereiten Sie auf Eis vor und stellen Sie sicher, dass Pipetten, Röhrchen und Medien vorgekühlt sind.
Befestigungslösung
N2Thermofischer17502048Medienbeilage
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)Stammzellen-TechnologienCA008-300
ReLeSRStammzellen-Technologien5872Reagenz für Ablösung und Übergabe
Rho-Kinase-Inhibitor Y27632- (Y)TocrisNr. 1254Arbeitskonzentration: 10 μm
SB431542Stammzellen-TechnologienArtikel-Nr.: 72234Arbeitskonzentration: 2 μm
T25 KulturflascheOlympus KunststoffeNr. 25-207Belüftete Kappen
T75 KulturflascheOlympus KunststoffeNr. 25-209Belüftete Kappen
kg kg kg

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Human Pluripotent Stem CellsAstrosphere FormationNeural DifferentiationRho kinase InhibitorECM coated PlateDetachment SolutionSpheroid AggregationAstrocyte ProgenitorsGrowth Factor MediumProgenitor Maturation

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