Methodenartikel

Differenzierung von induzierten neuralen Vorläuferzellen in Astrozyten

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Quelle: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Derivation adulter humaner Fibroblasten und deren direkte Umwandlung in expandierbare neurale Vorläuferzellen. J. Vis. Exp. (2015)

Dieses Video zeigt den Prozess zur Differenzierung von induzierten neuralen Vorläuferzellen (iNPCs) in Neuronen und Astrozyten mit Hilfe spezieller Medien.

Protokoll

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>1. Unterscheidung von iNPCs

  1. Differenzierung zur neuronalen Abstammung
    1. Kultivieren Sie Zellen auf lamininbeschichteten Platten, wie oben beschrieben. Wechseln Sie das Medium zu Neuro-Diff-Medien (DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300 ng/ml cAMP, 200 μM Vitamin C, 10 ng/ml BDNF, 10 ng/ml GDNF), wenn die Zellen zu etwa 70 % konfluent sind. Wechseln Sie drei Wochen lang jeden zweiten Tag das Medium. Zellen während der Differenzierung nicht teilen.
    2. Nach drei Wochen sollten die Zellen den neuronalen Marker TUJ1 exprimieren. Um reifere Neuronen und neuronale Subtypen zu erhalten, setzen Sie die Differenzierung bis zu 3 Monate fort.
  2. Differenzierung zur Glialinie
    1. Wechseln Sie das Medium auf gliale Induktionsmedien (1:1 DMEM/F-12 : Neurobasal, 1x N2, 1x B27, 10 μM β-Mercaptoethanol, 100 μM nicht-essentielle Aminosäuren, 1,5 mM L-Glutamin, 5 μg/ml Insulin, 40 ng/ml T3) einschließlich 20 ng/ml EGF, um die Differenzierung in gliale Vorläuferzellen zu induzieren. Entfernen Sie die Hälfte des Mediums und ersetzen Sie es etwa 2 Wochen lang jeden zweiten Tag durch frisches Medium. Während dieses Zeitraums sollten die Zellen in Gegenwart von 10 μM ROCK-Inhibitor Y27632 1:3 gespalten werden, wenn eine Konfluenz von 100 % erreicht ist.
    2. Nach 2 Wochen differenzieren Sie die Zellen weiter in Astrozyten: Wenn die Zellen fast zusammenfließen, wechseln Sie das Medium auf das kommerziell erhältliche Astrozytenmedium, wechseln Sie das Medium jeden zweiten Tag. Nach etwa 7 Tagen beginnen die Zellen, Astrozytenmarker (z. B. GFAP) zu exprimieren. Wenn Zellen während des Differenzierungsprotokolls zu 100 % konfluent werden, teilen Sie sie in Gegenwart von 10 μM ROCK-Inhibitor Y27632 in einem Verhältnis von 1:2 auf.

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
Astrozyten-MedienScienCell1801
Nr. B27LebenstechnologienArtikel-Nr.: 17504-044
BDNFPeprotechNr. 450-02
LagerSigmaNr. A6885
DMEMLebenstechnologienArtikel-Nr.: 41966-029
DMEM F12LebenstechnologienArtikel-Nr.: 11320-033
DmsoRothArtikel-Nr.: 4720
DPBS (Englisch)LebenstechnologienTel.: 14190-094
EGFLebenstechnologienPHG0313
FcsBiochrom AGNr. 50115
GDNFPeprotechNr. 450-10
InsulinSeralabGEM-700-112-P
L-GlutaminLebenstechnologienArtikel-Nr.: 25030-024
LamininSigmaNr. L2020
N2LebenstechnologienArtikel-Nr.: 17502-048
NeurobasalLebenstechnologienArtikel-Nr.: 21103-049
Nicht-essentielle AminosäurenLebenstechnologienTel.: 11140-050
AscorbinsäureSigmaNr. A4544
β-MercaptoethanolLebenstechnologien21985023

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Schlagwörter

AstrozytendifferenzierungGlia Induktionsmediumneuronaler Marker TuJ1Rho Kinase Inhibitorepidermaler WachstumsfaktorBeschichtung mit extrazellul rer MatrixMediumwechselprotokollZellproliferationgliale Vorl uferzellen

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