Eine Methode zum 3D-Bioprinting von murinen kortikalen Astrozyten

Zusammenfassung

Quelle: de Melo, B. A. G., et al., 3D-Bioprinting von murinen kortikalen Astrozyten für die Entwicklung von neuralähnlichem Gewebe. J. Vis. Exp. (2021)

Das Video zeigt den Prozess der Erstellung eines 3D-biogedruckten Konstrukts mit Astrozyten, die in einer Bioink-Lösung suspendiert sind. Das biogedruckte Konstrukt erleichtert nach der Vernetzung die Adhäsion und Ausbreitung der Astrozyten, wodurch neuralähnliches Gewebe gebildet wird.

Protokoll

>1. Synthese von Gelatinemethacryloyl (GelMA)

1. 10 g Gelatine aus Schweinehaut abwiegen und in 100 ml PBS auflösen, indem die Lösung auf einer Heizplatte bei 240 U/min und 50 °C gerührt wird, bis sie sich vollständig aufgelöst hat.
2. Fügen Sie unter einer Haube 2 ml Methacrylanhydrid (MA) hinzu, um einen geringen Grad der Funktionalisierung zu erreichen, und lassen Sie die Gelatineemulsion bei 240 U/min und 50 °C für 2 h.
   Vorsicht: MA Gefahrenhinweis: H302 + H332 (gesundheitsschädlich bei Verschlucken oder Einatmen), H311 (giftig bei Berührung mit der Haut), 314 (verursacht schwere Verbrennungen und Augenschäde....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
3D-Bioprinter	3D-Biotechnologie-Lösungen		Biodrucker auf Extrusionsbasis
Zange mit stumpfer Spitze	Integra Miltex	6--30	Pinzette für die Dissektion des Gehirns, die zuvor sterilisiert wurde
Rinderserumalbumin	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 9048-46-8	Proteasefrei, fettsäurefrei, im Wesentlichen globulinfrei
CaCl2	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 10043-52-4
Zellkulturflasche	Fisher Scientific	Artikel-Nr.: 156340	Kulturflasche T25
DAPI	Abcam (Englisch	Artikel-Nr.: ab224589	DAPI Färbelösung
DMEM/F12	Gibco; Life Technologies Corporation	12500062	DMEM/F-12 50/50, 1X (Dulbecco's Mod. Of Eagle's Medium/Ham's F12 50/50 Mix) mit L-Glutamin
Dyalisis-Schläuche	Sigma-Aldrich	Nr. D9527	Molekulargewichts-Cutoff = 14 kDa
Ethanol	Fisher Scientific	64-15-5	Qualität der Reagenzien
Fötales Rinderserum	Gibco; Life Technologies Corporation	12657011	Forschungs-Note
Fibrinogen	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 9001-32-5	Kristallines Fibrinogenpulver aus Rinderplasma
Gelatine	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 9000-70-8	Gelatinepulver aus Schweinehaut
Hanks gepufferte Salzlösung (HBSS)	Gibco; Life Technologies Corporation	14175095	Kein Calcium, kein Magnesium, kein Phenolrot
Laminin	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 114956-81-9	Laminin 1-2 mg/mL in 50 mM Tris-HCl
Methacryl-Anhydrid	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 760-93-0	Für die GelMA-Zubereitung
Nadel 22G	Fisher Scientific	NC1362045	Sterile stumpfe Nadel
Petrischale	Corning Incorporated	430591, 430588	Sterile Petrischalen von 35 und 100 mm
Photoinitiator	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 106797-53-9	2-Hydroxy-4′-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenon
Phosphatpuffer-Kochsalzlösung (PBS)	Gibco; Life Technologies Corporation	10010023	PBS 1 x, Kulturqualität, kein Calcium, kein Magnesium
Poly-L-Lysin	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 25988-63-0	Poly-L-Lysin-Hydrobromid mol wt 30.000-70.000
Spritze 5 mL	Bd	Artikel-Nr.: 1222C84	Sterile Spritze
Spritzenvorsatzfilter 2 μm	Fisher Scientific	Tel.: 09-740-105	Polypropylen-Filter für die Sterilisation
Thrombin	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 9002--04-4	Thrombin Cristralinpulver aus Rinderplasma
Triton X-100	Sigma-Aldrich	Artikel-Nr.: 9002-93-1	Laborqualität
Trypsin-EDTA	Gibco; Life Technologies Corporation	15400054	Trypsin ohne Phenolrot 1 x verdünnt in PBS
Well-Platte	Thermo Scientific	Artikel-Nr.: 144530	Sterile 24-Well-Platte

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