Retinsäure-induzierte Neurogenese anhand embryonaler Karzinomzellen der Maus

Zusammenfassung

Quelle: Leszczyński, P., et al., Neurogenese unter Verwendung von p19 embryonalen Karzinomzellen J. Vis. Exp. (2019)

Dieses Video zeigt eine einfache Technik zur Retinsäure-induzierten Neurogenese in embryonalen P19-Karzinomzellen der Maus. Retinsäure aktiviert Transkriptionsfaktoren und löst die Genexpression für die neuronale Differenzierung aus.

Protokoll

>1. Erzeugung von Aggregaten

1. 5 μl RA (Retinsäure) (1 mM Stamm, gelöst in 99,8 % Ethanol, gelagert bei -20 °C) zu den 10 ml Differenzierungsmedium geben und gut mischen (Endkonzentration von 0,5 μM RA).
   Anmerkung: RA ist lichtempfindlich. Eine niedrige Konzentration von Ethanol hat keinen Einfluss auf die Zelldifferenzierung.
2. Geben Sie 10 ml Differenzierungsmedium (mit RA) in die unbehandelte 100-mm-Kulturschale (für die Suspensionskultur).
3. Die 1 x 10⁶ Zellen in die 100 mm Schale (Schalenoberfläche 56,5 cm2) aussäen.
4. Der Kolben mit den Zellen wird 2 Tage lang bei 37 °C und 5 % ....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
DMEM hoher Glukosespiegel (4,5 g/L) mit L-Glutamin	Lonza	BE12-604Q
Ethanol 99,8 %	Chempur	CHEM*613964202
Fötales Rinderserum (FBS)	EUR x	Nr. E5050-03
Penicillin/Streptomycin 10K/10K	Lonza	DE17-602E
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS), 1x konzentriert ohne Calcium- und Magnesiumionen	Lonza	BE17- 517Q
Retinsäure	Sigma- Aldrich	Nr. R2625-50MG	Gelöst in 99,8 % Ethanol; bis zu 6 Monate bei -20 °C lagern
Trypsin 0,25% - EDTA in HBSS, ohne Calcium- und Magnesiumionen, mit Phenolrot	Bioseren	LM-T1720/500
1 mL Serologische Pipetten	Profilab	515.01
10 mL Serologische Pipetten	Profilab	515,1
100-mm-Schale für die Suspensionskultur	Corning	C351029
15 mL Zentrifugenröhrchen	Sigma- Aldrich	CLS430791-500EA
5 mL Serologische Pipetten	Profilab	Artikel-Nr.: 515,05
6-Well-Platte	Corning	CLS3516
Zellkulturflaschen, Oberfläche 25 cm im Quadrat	Sigma- Aldrich	CLS430639-200EA

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