Verfahren zur Erzeugung von Oligodendrozyten-konditioniertem Medium

Abstract

Quelle: Mazuir, E., et al. Erzeugung von Oligodendrozyten und Oligodendrozyten-konditioniertem Medium für Co-Kulturexperimente. J. Vis. Exp. (2020)

Dieses Video zeigt die Produktion von Oligodendrozyten-konditioniertem Medium (OCM) aus Zellen der Oligodendrozytenlinie, indem es sie betont, um ihre molekulare Freisetzung in das Medium zu verbessern. Dieses Medium, das reich an Wachstumsfaktoren, Zytokinen und anderen bioaktiven Molekülen ist, kann Neuronenkulturen zugesetzt werden, um Einblicke in den Einfluss von Oligodendrozyten-sezernierten Faktoren auf die neuronale Physiologie und Konnektivität zu erhalten.

Protocol

>1. Zellernte und -kultur der OL-Linie (OL)

HINWEIS: Diese Schritte sollten in einer Laminar-Flow-Haube unter sterilen Bedingungen durchgeführt werden.

1. Am Tag nach dem Schütteln das Bottenstein-Sato (BS) Medium gemäß Tabelle 1 zubereiten.
2. Spülen Sie beschichtete Petrischalen 3 Mal mit sterilem destilliertem Wasser aus.
3. Der Überstand der Kolben, der hauptsächlich Zellen der OL-Linie, aber auch einige Mikrogliazellen enthält, wird entnommen und auf unbeschichtete 100-mm-Petrischalen aufgebracht.
   Anmerkung: Dieser Schritt ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
B27 Beilage	ThermoFisher	17504044
D-(+)-Glukose-Lösung	Sigma	Nr. G8769
Dulbecco's Modifizierter Eagle Medium	ThermoFisher	31966021
Ethanol 100%	Sigma	32221-M
Ethanol 70%	VWR Chemikalien	Artikel-Nr.: 83801.36
Fötales Kälberserum	ThermoFisher	10082147
Neurobasal	ThermoFisher	21103049
Penicillin-Streptomycin	ThermoFisher	15140122
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung ohne Calcium und Magnesium	ThermoFisher	A1285601
Polyethylenimin (PEI)	Sigma	Nr. P3143
Bottenstein-Sato (BS) Medien
Apo-Transferrin Mensch	Sigma	Nr. T1147
BSA (Rinderserumalbumin)	Sigma	Nr. A4161
Dulbecco's Modifizierter Eagle Medium	ThermoFisher	31966021
Insulin	Sigma	I5500
PDGF	Peprotech	AF-100-13A
Penicillin-Streptomycin	ThermoFisher	15140122
Progesteron	Sigma	Nr. P8783
Putrescin-Dihydrochlorid	Sigma	Nr. 5780
Natriumselenit	Sigma	Nr. S5261
T3 (3,3',5-Trijod-L-thyronin-Natriumsalz)	Sigma	Nr. T6397
T4 (L-Thyroxin)	Sigma	Nr. T1775
Werkzeuge
0,22 μm Filter	Schneidermuskel	Tel.: 514-7010
1 mL Spritze	Terumo	1611127
100 mm Petrischale	Dutscher	Nr.: 193100
15 mL Röhrchen	Corning Biowissenschaften	Nr. 734-1867
50 mL Röhrchen	Corning Biowissenschaften	Nr. 734-1869
60 mm Petrischale	Dutscher	Nr. 67003