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Methodenartikel

Eine Technik zur Gewinnung und Dissoziation von Spinalganglien für neuronale Kulturen

3K Aufrufe

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8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: de Luca, A. C., et al., Dorsale Wurzelganglien Neuronen und differenzierte aus Fettgewebe: Ein In-vitro-Co-Kulturmodell zur Untersuchung der peripheren Nervenregeneration. J. Vis. Exp. (2015).

Dieses Video demonstriert eine Methode zur Entnahme von Neuronen aus den dorsalen Wurzelganglien (DRG). DRG aus der Wirbelsäule einer Ratte wird isoliert, mit Enzymen behandelt und dann mechanisch dissoziiert, um eine einzellige Suspension zu erhalten. Die Neuronen werden mittels Dichtegradientenzentrifugation von Gliazellen getrennt und in einem Wachstumsmedium kultiviert.

Protokoll

Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Versuchsaufbau

  1. Überprüfen Sie vor Beginn der Gewebe- und Zellentnahme, ob alle Werkzeuge steril sind. Falls erforderlich, autoklavieren Sie eine scharfe chirurgische Schere, eine sehr feine Pinzette und eine feine Standardzange. Sterilisieren Sie außerdem gegebenenfalls jedes Substrat vor der Zellaussaat durch UV-Sterilisation, Ethanol-Belichtung oder Dampfsterilisation.
  2. Aufbereitung von Medien und Stammlösungen für die Neuronenernte und -dissoziation
    1. Bereiten ....

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Offenlegungen

Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
100 μm ZellsiebBD BiowissenschaftenArtikel-Nr.: 352360Alternativ können 70 μm Siebe (Art.-Nr. 352350) verwendet werden
15 mL Kunststoff-RöhrchenSarstedtArtikel-Nr.: 62.554.002
50 mL Kunststoff-RöhrchenSarstedtArtikel-Nr.: 62.547.004
75 cm2 KolbenCorningBC301
Rinderserumalbumin (BSA)SigmaNr. A9205
Kollagenase Typ IVWorthington BiochemieLS004188Hinweis: Diese Kollagenase wird nur zur Dissoziation von DRG-Explantaten verwendet
Fötales Rinderserum (FBS)BioserenFB-1001
GlaspipettenFisher ScientificFB50253Scharfes Material, das entsprechend zu entsorgen
Nährstoffmischung F12 SCHINKENSigmaNr. N6658Sofern nicht anders angegeben bei 37 °C im Wasserbad erwärmen
Hank's Ausgewogene Salzlösung (HBSS)SigmaNr. H9394Sofern nicht anders angegeben bei 37 °C im Wasserbad erwärmen
N-2 Zuschlag (100x)InvitrogenArtikel-Nr.: 17502
Nervenwachstumsfaktor 2,5s-Protein, Submaxillardrüsen der Maus (NGF)MilliporeNC011
Penicillin-Streptomycin (PS)SigmaNr. P0781
PetrischalenCorning430165
Trypsin (2x Rinderpankreas)Worthington BiochemieLS003703Dies wird für die DRG-Dissoziation verwendet
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