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Methodenartikel
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8. Juli 2025
Quelle: Hakim, M. A., et al., Isolierung und funktionelle Analyse des arteriolären Endothels des Parenchyms des Mausgehirns. J. Vis. Exp. (2022)
Dieses Video zeigt eine Methode zur Isolierung der Endothelröhren aus dem Hirnparenchym der Maus. Durch eine Kombination aus enzymatischem Verdau und mechanischer Dissoziation entsteht eine intakte Röhre mit Endothelzellen.
Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen tierethischen Überprüfungskommission überprüft und genehmigt.
>1. Lösungen und Arzneimittel
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Abbildung 1: Dissektion und Isolierung von parenchymalen Arteriolen. (A) Isoliertes Mausgehirn mit intaktem Willis-Kreis. (B) Ein präpariertes rechteckiges Stück Hirngewebe, das das MCA enthält (weißer Pfeil). (C) Isolierung von Pia aus dem oberen Teil des Gewebes (Arteriole, blauer Pfeil). (D) Arteriolen (umrandet mit blauen Pfeilspitzen), die mit den mittleren Hirnarterien verbunden sind (gelbe .......
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Badkühler (Isotemp 500LCU) | ThermoFisher Scientific | 13874647 | |
| Kapillaren aus Borosilikatglas (Pinning) | Warner Instruments | G150T-6 | |
| Kapillaren aus Borosilikatglas (scharfe Elektroden) | Warner Instruments | GC100F-10 | |
| Kapillaren aus Borosilikatglas (Verreibung) | World Precision Instruments (WPI), Sarasota, FL, USA | Nr. 1B100-4 | |
| BSA: Rinderserumalbumin | Sigma | Nr. A7906 | |
| CaCl2: Calciumchlorid | Sigma | 223506 | |
| Kollagenase (Typ H Mischung) | Sigma | Nr. C8051 | |
| Digitalisierung der Datenerfassung | Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornien, USA | Digidata 1550A | |
| Sezierschale (Petriglas mit Holzkohle Sylgard Boden) | Instrumentierung lebender Systeme, St. Albans City, VT, USA | DD-90-S-BLK | |
| Dithioerythrit | Sigma | Nr. D8255 | |
| DMSO: Dimethylsulfoxid | Sigma | Nr. D8418 | |
| Elastase (Bauchspeicheldrüse des Schweins) | Sigma | Nr. E7885 | |
| Durchflussregelventil | Warner Instruments | FR-50 | |
| Schnittstelle für Fluoreszenzsysteme, ARC Lampe & Netzteil, Hyperswitch und PMT | Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornien, USA | IonOptix-Systeme | |
| Pinzetten (mit feiner Spitze, geschärft) | FST | Dumont #5 & Dumont #55 | |
| Traubenzucker | Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA) | Nr. G7021 | |
| HEPES: (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonsäure) | Sigma | Nr. H4034 | |
| KCl: Kaliumchlorid | Sigma | Nr. P9541 | |
| MgCl2: Magnesiumchlorid | Sigma | M2670 | |
| Mikromanipulator | Siskiyou | MX10 | |
| Mikropipettenabzieher (digital) | Sutter Instruments, Novato, CA, USA | P-97 oder P-1000 | |
| Mikroskop (Nikon-invers) | Nikon Instruments Inc, Melville, NY, USA | Ts2 | |
| Mikroskop (Nikon-invers) | Nikon Instruments Inc | Eclipse TS100 | |
| Mikroskoptisch (Aluminium) | Siskiyou, Grants Pass, OR, USA | 8090P | |
| Steuerung der Mikrospritzenpumpe | World Precision Instruments (WPI), Sarasota, FL, USA | SYS-MICRO4 | |
| NaCl: Natriumchlorid | Sigma | Nr. S7653 | |
| Papain | Sigma | Nr. P4762 | |
| Phasenkontrast-Objektive | Nikon Instruments Inc | (Ph1 DL; 10X und 20X) | |
| Schere (3 mm & 7 mm Klingen) | Fine Science Tools (oder FST), Foster City, Kalifornien, USA | Moria MC52 & 15000-00 | |
| Schere (Vannas-Stil; 9,5 mm und 3 mm Klingen) | Welt Präzisionsinstrumente | 555640S, 14364 | |
| Temperaturregler (Zweikanal) | Warner Instruments | TC-344B oder C | |
| Ventilsteuerung | Warner Instruments | VC-6 |
