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Differenzierung humaner pluripotenter Stammzellen in Neuronen mit gentechnisch veränderten Lentiviren

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Quelle: Assetta, B., et al., Generation von menschlichen Neuronen und Oligodendrozyten aus pluripotenten Stammzellen zur Modellierung von Neuron-Oligodendrozyten-Interaktionen. J. Vis. (2020).

Dieses Video zeigt den Prozess der Induktion menschlicher pluripotenter Stammzellen zur Differenzierung in Neuronen durch Transfektion mit gentechnisch veränderten Lentiviren, die ein neurogenes Transkriptionsfaktor-Gen tragen, unter der Kontrolle eines Tetracyclin-responsiven Elements, gefolgt von einer Behandlung mit einem Tetracyclin-Derivat und einem Reifungsmedium.

Protocol

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>1. Induktion menschlicher Neuronen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen

  1. Lentivirus-Vorbereitung (~5 Tage, detailliertes Protokoll wie zuvor beschrieben)
    1. Platte ~1 Million HEK293T Zellen in jedem T75-Kolben, um sie bei der Transfektion zu ~40 % konfluent zu haben. Transfizieren Sie sie mit Plasmiden, die das Tetracyclin-induzierbare Ngn2 und das Puromycin-resistente Gen (PuroR; unter derselben TetO-Promotorkontrolle), rtTA exprimieren, und den drei Helferplasmiden pRSV-REV, pMDLg/pRRE und VSV-G (12 μg lentivirale Vektor-DNA und je 6 μg der Helferplasmid-DNA). Bereiten Sie mindestens drei Flaschen pro Lentiviruspräparation ....

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Results

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figure-results-1
Abbildung 1: Direkte Generierung von human-induzierten Neuronen (iNs) aus hPSCs. (A) Flussdiagramm der iN-Erzeugung. (B) Repräsentative Hellfeld- und Immunfluoreszenzbilder der Ausgangskultur von humanen pluripotenten Stammzellen (H1) zur Bestätigung der Pluripotenz. Oct4 wird in Rot und Sox2 in Grün dargestellt. (C) Repräsentative Hellfeldbild.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AccutaseSTEMCELL-Technologien7920
B27 BeilageThermoFisher17504044
DMEM/F12 mittelSTEMCELL-TechnologienArtikel-Nr.: 36254
DmsoThermoFisherNr. D12345
doxycyclinMilliporeSigmaNr. D3072
H1 humane ES-ZellenWiCellWA01
MatrigelCorning354234
mTeSR plusSTEMCELL-TechnologienArtikel-Nr.: 5825
N2-ErgänzungThermoFisher17502001
Neurobasal Ein MediumThermoFisherTel.: 10888-022
Nicht essentielle AminosäurenThermoFisherTel.: 11140-050
PeiVWRTel.: 71002-812
pMDLg/pRREAddgeneArtikel-Nr.: 12251
PolybreneMilliporeSigmaTR-1003-G
pRSV-REVAddgeneArtikel-Nr.: 12253
PuromycinThermoFisherA1113803
STEMdiff Einfriermedien für neuronale VorläuferSTEMCELL-Technologien5838
STEMdiff SMADi Neuronales InduktionskitSTEMCELL-TechnologienNr. 8581
Tempo-iOlogo: Humane iPSC-abgeleitete OPCsTempo BioScienceArtikelnummer102
TetO-NG2-PuroAddgeneArtikel-Nr.: 52047
VSV-GAddgeneArtikel-Nr.: 12259
kg kg

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Tags

Human Pluripotent Stem CellsNeuron DifferentiationEngineered LentivirusesTetracycline Responsive ElementNeurogenic Transcription FactorViral TransfectionPuromycin SelectionCell Detachment SolutionECM Coated WellsMaturation Medium

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