Isolierung mehrerer Zelltypen aus einem Mausgehirn durch mechanische Homogenisierung

Abstract

Quelle: Molina Estevez, F. J., et al. Simultane durchflusszytometrische Charakterisierung mehrerer Zelltypen, die aus dem Gehirn/Rückenmark von Mäusen gewonnen wurden, durch verschiedene Homogenisierungsmethoden. J. vis. exp. (2019).

Dieses Video zeigt die Isolierung mehrerer Zelltypen aus dem Gehirngewebe von Mäusen. Das Gewebe wird zunächst mit einer Gewebemühle in einer Salzlösung mechanisch geschert, um ein osmotisches Gleichgewicht aufrechtzuerhalten. Das Gewebehomogenat wird dann einer Dichtegradientenzentrifugation unterzogen, um Zelltrümmer zu entfernen. Die Zellen werden dann zur weiteren Analyse in einer Lösung resuspendiert.

Protocol

Haftungsausschluss: Alle Verfahren, die die Probenentnahme beinhalten, wurden in Übereinstimmung mit den IRB-Richtlinien des Instituts durchgeführt.

>1. Mechanische Homogenisierung des Gehirns und des Rückenmarks

HINWEIS: Die in diesem Abschnitt beschriebenen Volumina reichen für die Homogenisierung der Hälfte des Gehirns oder des Rückenmarks aus.

1. Kühlen Sie den Glasmörser der Dounce Tissue-Mühle (Table of Materials) auf Eis vor.
2. Geben Sie 3 ml vorgekühlte 1x Hank's ausgewogene Salzlösung (HBSS) in den Mörser.
3. Über....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
10X HBSS (frei von Calcium, Magnesiumchlorid und Magnesiumsulfat)	Gibco	Artikel-Nr.: 14185-052
70 mm Zellsieb	Corning	431751
Konische Röhrchen (15 mL)	CellTreat (Englisch)	229411
Konische Röhrchen (50 mL)	CellTreat (Englisch)	229422
Dounce Tissue Grinder Set (Enthält Mörser sowie Stößel A und B)	Sigma-Aldrich	D9063-1SATZ
Percoll	GE Gesundheitswesen	10266569	Verkauft als unsteriles Reagenz
Percoll	Sigma	65455529	Steriles Reagenz (zur Verwendung für Anwendungen, die Sterilität erfordern)
Percoll PLUS	Sigma	GE17-5445-01	Reagenz mit sehr geringen Spuren von Endotoxin