Gewinnung einer gemischten Gliazellkultur aus einem neonatalen Mausgehirn

Zusammenfassung

Quelle: Sarkar, S. et al., Schnelle und verfeinerte CD11b-Magnetisolierung von primären Mikroglia mit verbesserter Reinheit und Vielseitigkeit. J. Vis. Exp. (2017)

Das Video demonstrierte die Methode zur Isolierung und Kultivierung von Zellen aus einem neugeborenen Mäusegehirn. Es beinhaltete die enzymatische und mechanische Dissoziation des Gehirns, gefolgt von der Kultivierung in Wachstumsmedien ohne neuronalen Wachstumsfaktor, um eine gemischte Gliapopulation zu erhalten.

Protokoll

Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen tierethischen Überprüfungskommission überprüft und genehmigt.

>1. Wachstum von gemischten Gliakulturen

1. Enthaupten Sie 1- bis 2 Tage alte Welpen schnell mit einer 5,5-Zoll-Schere und legen Sie die Köpfe sofort in ein 50-ml-Röhrchen auf Eis. Beachten Sie, dass diese Enthauptung die Art der Euthanasie ist.
2. Machen Sie in einer Laminar-Airflow-Haube mit einer geraden 4,5-Zoll-Mikropräparierschere einen kleinen Schnitt in den Schädel und die Hirnhäute. Beginnen Sie mit dem Schneiden vom kaudalen Ende bis zum rostralen Ende (Nase). Gelangen Sie unter di....

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
DMEM/F12 (1:1) (1x)	Lebenstechnologien	11330057
Natriumpyruvat	Lebenstechnologien	11360070
MEM Nicht-essentielle Aminosäuren (100x)	Lebenstechnologien	11140050
L-Glutamin (100x)	Lebenstechnologien	25030081
Edta	Fisher Scientific	AM9260G
Fötales Rinderserum	Sigma	Nr. 13H469
0,25 % Trypsin-EDTA	Gibco von Life Technologies	Artikel-Nr.: 25200