Methodenartikel

Infektion von primären Mittelhirnneuronen der Maus mit gentechnisch veränderten Adeno-assoziierten Viren

8. Juli 2025

In diesem Artikel

Zusammenfassung

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Quelle: Bancroft, E. A., et al., Quantifizierung spontaner Ca2+-Flüsse und ihrer nachgeschalteten Effekte in primären Mittelhirnneuronen der Maus. J. Vis. (2020).

Dieses Video zeigt, wie primäre Mittelhirnneuronen von Mäusen mit Adeno-assoziierten Viren infiziert werden, die einen fluoreszierenden Kalziumindikator tragen. Die Fluoreszenz des Indikators bestätigt die erfolgreiche Infektion und ermöglicht die Echtzeitüberwachung der neuronalen Infektion.

Protokoll

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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.

HINWEIS: Zellkulturlösungen sollten mit sterilen Verfahren in einer biologischen Sicherheitswerkbank hergestellt und bei 0,2 μm filtriert werden, um eine Kontamination zu verhindern.

>1. Vorbereitung von Lösungen und Nährmedium

  1. Bereiten Sie die Laminin-Beschichtungslösung vor, indem Sie 20 μl 1 mg/ml-Lamininbrühe in 2 ml steril destilliertes H2O verdünnen. Am Tag der Dissektion zubereiten.
  2. Be....

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Offenlegungen

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
10X NA 0,3 Wasser-ImmersionsobjektivOlympUMPLFLN10XW
12 mm rundes Deckglas Nr. 1Produkte von Phenix ResearchMS20-121
20X NA 0,85 Öl-TauchobjektivOlympUPLSAPO20XO
35 mm unbeschichtete Zellkulturschalen aus KunststoffVWRTel.: 25382-348
40X NA 0,3 Wasser-TauchobjektivOlympLUMPLFLN40XW
60X NA 1.35 Öl-TauchobjektivOlympUPLSAPO60XO
Ampicillin (Natrium)Goldene BiografieNr. A-301-25
B-27 ZuschlagThermoFisher1750404450x Lagerbestand
Binokulares MikroskopKent ScientificKSCXTS-1121
Rinderserumalbumin (BSA)Sigma-AldrichNr. A7030
Calciumchlorid (CaCl2), wasserfreiSigma-Aldrich746495
Desoxyribonuklease I (DNase)Sigma-AldrichDN25
D-Glukose, andydrösSigma-AldrichRDD016
DMEM + GlutaMAX mittelThermoFisher10569010500 mL
Serum für PferdeThermoFisher26050088hitzeinaktiviert
Lichtleiter-Beleuchtung, 100VKent ScientificKSC5410
Filtersystem, PES 22UM 250MLVWRTel.: 28199-764
Konfokalmikroskop Fluoview 1000Olymp
Konfokalmikroskop Fluoview 1200Olymp
GlutaMAX ErgänzungThermoFisher35050061
Hanks-balancierte Salzlösung (HBSS) 1xThermoFisher14175095500 mL
HEPESVWRTel.: 101170-478
HeraCell 150 CO2-InkubatorHeraeus (ThermoFisher)
ImageJ v1.52eNih
IRIS-Feine Schere (runde) - S/S Str/31*8mm/13cmRwdNr. S12014-13
Kanamycin-MonosulfatGoldene BiografieK-120-25
LamininSigma-AldrichNr. L2020
L-AscorbinsäureSigma-AldrichNr. A7506
L-GlutaminsäureVWR97061-634
Magnesiumchlorid (MgCl2), andydrösSigma-AldrichM8266
MPII Mini-Peristaltikpumpe, 115/230 VAC, 50/60 HzHarvard-ApparaturNr. 70-2027
MÜLLER Micro Pinzette-Str, 0,15mm Spitzen, 11cmRwdNr. F11014-11
NBQX (Englisch)Hallo BiografieNr. HB0443
Neurobasales MediumThermoFisher21103049500 mL
Normales Ziegenserum (NGS)Abcam (EnglischAB7481
pAAV.Syn.GCaMP6f.WPRE.SV40AddgeneArtikel-Nr.: 100837-AAV1Titer: 1,00 E+13 gc/ml
PapainWorthington Biomedical CorporationLS003126
Penicillin-StreptomycinThermoFisher1514012210.000 U/ml
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) 1xThermoFisher10010049500 mL
Poly-L-LysinSigma-AldrichNr. P4832
Poly-L-OrnithinSigma-AldrichNr. P4957
Kaliumchlorid (KCl), wasserfreiSigma-Aldrich746436
Pumpenkopf-Schlauchstücke für MPIIHarvard-ApparaturTel.: 55-4148
Natriumchlorid (NaCl), wasserfreiSigma-Aldrich746398
SaccharoseSigma-AldrichNr. S7903BioXtra, ≥99,5 % (GC)
Zeitschwangere weibliche C57BL/6 MäuseTexas A&M Institut für Genomische Medizin
Triton X-100Sigma-AldrichX100500 mL
Pipettenspitzen mit breiter Bohrung, blau P1000VWRTel.: 83007-380
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Schlagwörter

Prim re MausneuronenFluoreszierender Calcium IndikatorVirale InfektionKonfokale BildgebungGlutamat RegistrierungspufferGCaMP6f ExpressionLive Cell ImagingNeuronenspezifischer PromotorVirale Anheftung

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