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Methodenartikel
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8. Juli 2025
Quelle: Lunsford, E. T., et al. Aktivität von Neuronen der hinteren Seitenlinie beim Schwimmen im Zebrafisch. J. Vis. Exp. (2021).
Dieses Video zeigt die Aufzeichnung von elektrischen Signalen von den afferenten Neuronen in einer gelähmten Zebrafischlarve, indem eine Mikropipette in der Nähe des Ganglions der Seitenlinie positioniert und eine lose Dichtung für die Signalerfassung gebildet wird. Die extrazelluläre Lösung erhält während dieses Prozesses die neuronale Lebensfähigkeit.
Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Vorbereitung von Materialien für elektrophysiologische Aufzeichnungen
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Abbildung 1: Gleichzeitige elektrophysiologische Aufzeichnung der Aktivität des afferenten Neurons der hinteren Seitenlinie und der ventralen motorischen Wurzel. (A). Beispiel für eine Aufzeichnungselektrode mit Loose-Patch-Afferent (i) und einer ventralen motorischen Wurzel (ii). Die Maßstabsbalken stellen 50 μm dar. (B) Zebrafis.......
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| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 100 mL Becherglas | Pyrex | 1000 | Gefäß für Ätzmittel |
| 10x Wasser-Immersionsobjektiv | Olymp | UMPLFLN10xW | Geringe Vergrößerung zur Positionierung der Larven und zur Aufnahme der Elektrode |
| 40x Wasser-Immersionsobjektiv | Olymp | LUMPLFLN40XW | Höhere Vergrößerung für die Positionselektrodenspitze und die Einrichtung einer Patch-Klemme |
| BNC-Koaxialkabel | ThorLabs (Englisch) | Artikel-Nr.: 2249-C-12 | Anschluss von Verstärker- und Digitizer-Kanälen; 4 erforderlich |
| Kapillaren aus Borosilikatglas mit Filament | Warner Instruments | G150F-3 | Innendurchmesser: 0,86, Außendurchmesser: 1,50; Kapillarglas zur Bildung von Aufzeichnungselektroden |
| Computer | N/A | N/A | Jeder Computer sollte funktionieren |
| DC-Stromversorgung | Tenma | Tel.: 72-420 | Wird zum elektrischen Ätzen von Präparierstiften verwendet |
| Digitalisierer für Elektrophysiologie | Axon Instrumente, Molekulare Bauelemente | Axon DigiData 1440A | Ermöglicht die Erfassung von Patch-Clamp-Daten |
| Faden | Sutter Instrument Unternehmen | FB255B | 2,5 mm Box-Filament für Mikropipettenabzieher |
| Feine Pinzette | Werkzeuge für die Feinwissenschaft | Dumont #5 (0,05 x 0,02 mm) Artikel Nr. 11295-10 | Wird verwendet, um Larven zu manipulieren und Stecknadeln einzuführen |
| DIC-Mikroskop mit festem Tisch | Olymp | BX51WI | Mikroskop zur Visualisierung und Erstellung von Patch-Clamp-Aufnahmen |
| Flexible, konische Pipettenspitze | Fisher Scientific | Tel.: 02-707-169 | Flexible Spitzen ermöglichen das Einführen in die Aufzeichnungselektrode, um extrazelluläre Lösung an der Spitze abzugeben |
| FluoroSchale | World Precision Instruments Inc. | Nr. FD3510-100 | Abdeckung Schüssel mit Glasboden Aufnahmeschale |
| KimWipe (Englisch) | KimTech | Artikel-Nr.: 34155 | Task Wipe zum Ableiten von überschüssiger Flüssigkeit von Larven |
| Kwik-Gard | World Precision Instruments Inc. | 710172 | Selbstmischendes Sylgard-Elastomer |
| Mikroelektroden-Verstärker | Axon Instrumente, Molekulare Bauelemente | MultiClamp 700B | Patch-Clamp-Verstärker für Zweikanal-Aufnahmen |
| Mikroschmiede | Narishige | MF-830 Mikroschmiede | So polieren Sie die Aufnahmeelektrode |
| Steuereinheit für Mikromanipulatoren | Siskiyou | MC1000-eR/T | 4-Achsen-Drehregler-Koordinator zur Steuerung des Mikromanipulators |
| Abzieher für Mikropipetten | Sutter Instrument Unternehmen | Flammend/Braun P-97 | Zum Einziehen von Kapillarglas in Aufzeichnungselektroden |
| Mikroskop-Steuereinheit | Siskiyou | MC1000e | Positionierung des Mikroskops um den festen Tisch und Vorbereitung |
| Motorisierter Mikromanipulator | Siskiyou | MX7600 | Positioniert den Kopftisch und die angebrachte Aufnahmeelektrode für die Patch-Clamp-Aufnahme |
| MultiClamp Kommandant | Molekulare Bauelemente | 2.2.2 | Herunterladbar von der Download-Seite für Axon MultiClamp 700B Commander |
| Optischer Lufttisch | Newport Corporation | VH3036W-OPT | Breadboard-Isolationstisch zum Schwimmen des Mikroskops und zur Minimierung von Vibrationen während der Aufnahme |
| pCLAMP | Molekulare Bauelemente | 10.7.0 | Herunterladbar von Axon pCLAMP 10 Software zur Erfassung und Analyse von Elektrophysiologie-Datenerfassung und -analyse auf der Download-Seite |
| Petrischale | Falke | 35-3001 | Wird verwendet, um Larven in Lähmungsmittel zu tauchen |
| Pipettenhalter | Molekulare Bauelemente | 1-HL-U | Halten Sie die Aufnahmeelektrode fest und verbinden Sie sie mit dem Kopftisch |
| Pneumatischer Wandler | Biomedizinische Instrumente von Fluke | DPM1B | Zur Steuerung des Innendrucks der Aufzeichnungselektrode |
| Kaliumhydroxid | Sigma-Aldrich | 221473-25G | Ätzmittel zum Ätzen von Präparierstiften |
| Silikon-Schlauch | Tygon | 14-169-1A | Schlauch zum Verbinden des pneumatischen Wandlers mit dem Pipettenhalter |
| stereomikroskop | Carl Zeiss | Stemi 2000-C | Wird zur Visualisierung von Stecknadelspitzen und bei der Vorbereitung von Larven verwendet |
| Rasierklinge mit gerader Kante | Canopus | Bestellen Sie bei amazon.com | Schneidet den Wolframdraht ab, während er Sezierstifte herstellt |
| Spritze | Becton Dickinson Compoany | 309602 | Gefüllt mit extrazellulärer Lösung zur Injektion in Aufzeichnungselektroden |
| Pipette übertragen | Sigma-Aldrich | Z135003-500EA | Unsterile Einwegpipette zum Übertragen von Larven |
| Tricain-Methansulfonat | Syndel | Artikel-Nr.: 12854 | Pharmazeutisches Aneasthetikum, das zur Einschläferung von Larven mit hoher Dosierung verwendet wird. |
| Wolframdraht | World Precision Instruments Inc. | Artikel-Nr.: 715500 | 0,002 Zoll, 50,8 μm Durchmesser; wird zur Herstellung von Sezierstiften verwendet |
| Vakuum-Filtrationsanlage | Sigma-Aldrich | SCGVU11RE | Sterile Einweg-Vakuumfiltrationseinheiten zur Sterilisation extrazellulärer Lösungen, die für elektrophysiologische Elektrodenringer verwendet |
| Spannungs-Zange Strom-Zange Kopftisch | Molekulare Bauelemente | CV-7B | Lieferung mit MultiClamp 700B-Verstärker, der als linker und rechter Kopftisch verwendet wird |
| α-Bungarotoxin | ThermoFisher | Nr. B1601 | Zur Immobilisierung der Larven vor der Aufnahme |
