Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
PV-Cre Knock-in-Mäuse im Alter von 10-25 Wochen wurden verwendet. Die Mäuse wurden unter normalen Bedingungen in der Tieranlage untergebracht und in einem 12-Hell-Dunkel-Zyklus gehalten.
>1. Vorbereitung von Wolframdraht-Arrays für LFP-Aufnahmen
- Kleben Sie eine optische Faser so auf das Drahtarray, dass sich die Spitze der Faser auf Höhe des kürzesten Drahtes befindet und sich die Faserspitze in unmittelbarer Nähe befindet, aber die Wolframdrähte nicht berührt. Halten Sie den Winkel der Faser so klein wie möglich, um Gewebeschäden während der Implantation zu vermeiden.
>2. Optogenetische Stimulation und elektrophysiologische Datenerfassung
- Überprüfen Sie die Lichtleistung des Patchkabels. Schätzen Sie die Lichtleistung der Faserspitze nach dem Anschluss in Abhängigkeit von der Übertragungsrate der implantierten Faser. Stellen Sie sicher, dass die Lichtleistung der Faserspitze zwischen 5 und 15 mW liegt, um eine zuverlässige Mitnahme zu ermöglichen.
- Verbinden Sie den Kopfstufen-Vorverstärker mit dem chronisch implantierten Stecker. Verbinden Sie das Glasfaser-Patchkabel mit der chronisch implantierten Hippocampus-Faser für optogenetische Stimulationsexperimente. Bei Experimenten zur Stimulation von Kontrolllicht wird die optische Faser mit einer Dummy-Ferrule verbunden, die mit dem Headset verbunden ist.
- Platzieren Sie die Maus in der Aufnahmekammer.
- Öffnen Sie die Software, um den Stimulusgenerator zu steuern und das Stimulationsprotokoll zu generieren.
- Wählen Sie den Kanal aus, der den 473-nm-DPSS-Laser steuert.
- Öffnen Sie die Software des Aufnahmesystems. Klicken Sie auf "ACQ" zum Abrufen und "REC" zum Aufnehmen. Warten Sie, bevor Sie die Lichtstimulation starten, um das Verhalten der Grundlinie aufzuzeichnen (z. B. 2 Minuten zum Abrufen der Basisliniengeschwindigkeit oder 30 Minuten zum Extrahieren der Basislinien-Ortsfelder).
- Öffnen Sie die Software, um den Stimulusgenerator zu steuern. Klicken Sie auf "Datei > Öffnen" und wählen Sie die gewünschte Protokolldatei aus. Klicken Sie auf "Herunterladen und starten", um die Lichtstimulation zu starten.
