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Alle Verfahren, an denen Tiermodelle beteiligt sind, wurden vom lokalen institutionellen Tierpflegeausschuss und dem Tierprüfungsausschuss von JoVE überprüft.
>1. Aufzeichnung der auditiven Hirnstammantwort (ABR)
- Betäuben Sie Ratten von Sprague Dawley (SD) (1-14 Tage alte Welpen und 2 Monate alte Erwachsene, beide Geschlechter) mit einer einzigen Injektion von 1,5% Natrium-Pentobarbital (22 mg/kg für Jungtiere und 30 mg/kg für Erwachsene, intraperitoneal (i.p.).
- Legen Sie das betäubte Tier in eine Polyethylen-Schaumform, um den Körper des Tieres ruhig zu stellen. Stellen Sie das Tier auf eine Antivibrationsliege in einem schalldämpfenden Raum. Halten Sie die Körpertemperatur des Tieres mit einem Heizkissen auf 37,5 °C.
- Wischen Sie den Kopfbereich mit 70 % (vol/vol) Ethanol ab. Machen Sie mit einer feinen Schere einen 1-2 mm großen Schnitt ventrolateral zur äußeren Ohrmuschel, um die Referenzelektrode oder den Boden zu platzieren. Eine subdermale Nadelelektrode (Aufzeichnungselektrode) befindet sich über dem Schädelvertex (Abbildung 1A).
- Erzeugen Sie mit dem Funktionsgenerator kalibrierte Tonausbrüche (1 ms Anstieg/Abfall, 3 ms Plateau) verschiedener Frequenzen (2, 4, 8, 16, 24 und 32 kHz) und Intensitäten (von 85 auf 10 dB SPL in 5-dB-Schritten verringert). Variieren Sie die Frequenz und Amplitude manuell oder mit einem Computer. Geben Sie Schallreize über einen elektrostatischen Lautsprecher ab, der sich in 10 cm Entfernung zum Kopf des Tieres befindet.
- Filtern (100-1.000 Hz), verstärken und mitteln (256-mal) das erzeugte Klangpotenzial mit einem Multifunktionsprozessor, um die ABRs zu erhalten. Die ABR-Traces werden online überwacht und für die Offline-Analyse gespeichert. Es dauert etwa 40 Minuten, bis die ABR-Aufnahme von einem Tier abgeschlossen ist.
Anmerkung: In der Regel können drei bis sieben Peaks (Welle I bis Welle VII) mit Latenzen von weniger als 15 ms identifiziert werden (Abbildung 1B). Die ABR-Schwelle ist definiert als der minimale Schallpegel, bei dem die Wellen I und II detektiert werden können.
- Einschläfern, bevor die Tiere aus der Narkose erwachen (mit einer intraperitonealen Injektion von 0,3 ml 1,5% Natrium-Pentobarbital).
