Stimulation der auditorischen Nervenwurzel und postsynaptische Stromaufzeichnungen in einer Keilscheibe des Maus-Gehirns

Abstract

Quelle: Fischl, M. J., et al. In Vitro Keilscheibenvorbereitung zur Nachahmung der Konnektivität neuronaler Schaltkreise in vivo. J. Vis.(2020)

Dieses Video demonstriert ein Protokoll zur Stimulation der auditorischen Nervenwurzel und zur Aufzeichnung postsynaptischer Ströme in medialen olivocochlären Neuronen in Keilschnitten des Mausgehirns.

Protocol

Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Ethikkommission für Tiere überprüft und genehmigt.

>1. Aufbau und Aufzeichnung der Elektrophysiologie

1. Platzieren Sie die Wedge-Slice in der Aufnahmekammer und sichern Sie die Slice mit einer Harfe oder einem Stabilisierungssystem. Perfundieren Sie das Gewebe kontinuierlich mit einer Geschwindigkeit von 7-10 ml/min mit warmem (35 °C) ACSF, das mit Karbogen blasiert ist.
2. Identifizierung genetisch markierter medialer olivocochlederer MOC-Neuronen im ventralen Kern des trapezförmigen Körpers VNTB mittels Epifluoreszenz mit 561 nm Emissionsfiltern für ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A1R aufrechtes konfokales Mikroskop	Nikon Instrumente		Elektrophysiologie und bildgebendes Mikroskop, kann jedes Mikroskop sein, das mit der Elektrophysiologie kompatibel ist
Elektrode Borosilikatglas mit Filament AD 1,5 mm, ID 1,1 mm, 10 cm lang	Sutter-Instrument	BF150-110-10	Patch-Klemmung Pipette Glas
Elektroden-Füller MicroFil	WPI	CMF20G	Patch-Elektroden-Pipettenfüller
Inline-Lösungsheizung	Warner Instruments (GSAdvantage)	SH-27B	Heizung für Scheibenperfusionssystem
Multi-Mikromanipulator-Systeme	Sutter Instrumente	MPC-200 mit MP285	Mikromanipulatoren für Patch-Clamp und Stimulationselektrodenplatzierung
P-1000 horizontaler Pipettenabzieher für Mikropipetten aus Glas	Sutter-Instrumente	FG-P1000	Patch-Klemme Pipettierer Abzieher
Patch-Clamp-Verstärker und Software	HEKA	EPC-10 / Patchmaster Weiter	Kann jeder Verstärker/jede Software sein
Aufnahmekammer	Warner Instruments	RC26G	Scheibenbad während der Aufnahme
Aufnahme Kammerharfe	Warner Instruments	640253	Stabilisiert die Schicht während der elektrophysiologischen Aufzeichnung
Scheiben-Inkubationskammer	Sonderanfertigung		Beheizte, sauerstoffhaltige Haltekammer für Scheiben während der Auffrischung nach dem Schneiden
Stimulus-Isolationseinheit	A.M.P.I.	Iso-Flex	Stimulus-Isolationseinheit für die Elektrophysiologie
Spritze 60CC	Fischer Scientific (Intramalls)	Tel.: 14-820-11	Elektrophysiologie Handhabung von Perfusionsflüssigkeiten
Temperaturregler	Warner Instruments (GSAdvantage)	TC-324C	Temperaturregler für das Schichtperfusionssystem
Schlauch 1/8 AD 1/16 ID	Fischer Scientific (Intramalls)	Tel.: 14-171-129	Elektrophysiologie Handhabung von Perfusionsflüssigkeiten
Tugsten konzentrische bipolare Mikroelektrode	WPI	TM33CCINS	Stimulationselektrode für die Elektrophysiologie