Eine intrazerebroventrikuläre Injektion zur Analyse der Verteilung des murinen Cytomegalievirus in einem neonatalen Mausgehirn

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Quelle: Kawasaki, H., et al. Intracerebroventrikuläre und intravaskuläre Injektion von Viruspartikeln und fluoreszierenden Mikrokügelchen in das Gehirn von Neugeborenen. J. Vis. Exp. (2016).

Dieses Video zeigt den intrazerebroventrikulären Injektionsprozess zur Untersuchung der Verteilung des murinen Cytomegalievirus (MCMV) im Gehirn von Neugeborenen. MCMV, das entwickelt wurde, um ein verstärktes grün fluoreszierendes Protein (EGFP) für die Sichtbarkeit zu exprimieren, wird in den lateralen Ventrikel des Gehirns eines Mäusewelpen injiziert. Das injizierte Virus zirkuliert durch die Zerebrospinalflüssigkeit und infiziert Zellen im periventrikulären Bereich, einschließlich der Marginalzone, des Plexus choroideus und der subventrikulären Zone.

Protokoll

1. ICV-Injektion von MCMV und fluoreszierenden Mikrokügelchen in neugeborene Mäuse

Halten Sie normal trächtige ICR-Mäuse in einer temperaturkontrollierten Einrichtung unter einem 12-stündigen Hell-Dunkel-Zyklus. Die Neugeborenen werden am Tag der Geburt mit P 0,5 bezeichnet.
Sterilisieren Sie eine 10-μl-Spritze und eine 27-g-Nadel mit 70 % Alkohol.
Laden Sie die Injektionslösung (5 μl), die MCMV oder fluoreszierende Mikrokügelchen enthält, in die Nadel, indem Sie vorsichtig am Kolben der Spritze ziehen.
Halten Sie die neugeborene Maus (P 0,5) fest, indem Sie die Maus für 3 - 4 Minuten auf Eis legen. Sobald das Tier unter Narkose steht, verwenden Sie die Zehenkneifreaktionsmethode, um die Narkosetiefe zu bestimmen.
Markieren Sie die Injektionsstelle mit einem ungiftigen Laborstift an einer Stelle, die etwa 0,7 - 1,0 mm lateral der sagittalen Naht und 0,7 - 1,0 mm kaudal vom neonatalen Bregma entfernt ist (Abbildung 1A).
Führen Sie die Nadel 2 mm tief senkrecht zur Schädeloberfläche an der markierten Injektionsstelle ein. Markieren Sie als Referenz 2 mm von der Nadelspitze entfernt mit einem ungiftigen Maker.
Injizieren Sie langsam 5 μl MCMV (ca. 5 × 10⁵ PFU) in den lateralen Ventrikel, ohne die Kopfhaut zu öffnen (Abbildung 1B).
Bei einer anderen Gruppe von Mäusen wird eine 5-μl-Lösung, die fluoreszierende Mikrokügelchen (0,1 - 0,3 μm, ca. 5,75 × 10⁸Partikel) enthält, nach der gleichen Methode injiziert.
Entfernen Sie die Nadel langsam 10 - 20 Sekunden nach Beendigung der Kolbenbewegung, um einen Rückfluss zu verhindern.
Um sich zu erholen, halten Sie die Mäuse 5 - 10 Minuten in einem warmen Behälter, bis die Bewegung und die allgemeine Reaktionsfähigkeit wiederhergestellt sind.
Entnehmen Sie das Gehirn zu einer Reihe von Zeitpunkten (3, 12, 24, 48 und 72 Stunden) nach der Injektion.

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Ergebnisse

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Abbildung 1: Injektionsstellen der neugeborenen Maus. (A, B) ICV-Injektion von 5 μl MCMV (ca. 5 × 10⁵ PFU) oder von 5 μl Mikrokügelchen (ca. 5,75 × 10⁹ Partikel). (A) Die Injektionsstelle befindet sich in der Mitte zwischen Ohr und Auge (etwa 0,7 - 1,0 mm lateral der sagittalen Naht und 0,7 - 1,0 mm kaudal vom neonatalen Bregma). (B) Eine 27-...