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Quantifizierung der Verteilung eines präsynaptischen Proteins im Gehirn von Mäusen mittels Immunfluoreszenz

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

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Quelle: Wallrafen, R., et al. Quantifizierung der heterogenen Verteilung eines synaptischen Proteins im Gehirn von Mäusen mittels Immunfluoreszenz. J. Vis. Exp. (2019).

Dieses Video zeigt die Immunfluoreszenzfärbung eines Maushirnschnitts, um die Verteilung eines spezifischen präsynaptischen Proteins zu quantifizieren. Der Prozess umfasst das Blockieren unspezifischer Stellen, das Aufbringen von Primärantikörpern für das Zielprotein und einen Referenzmarker, gefolgt von der Markierung von Sekundärantikörpern und der nuklearen Gegenfärbung. Der Referenzmarker gewährleistet eine genaue Quantifizierung, indem er eine konsistente Ausgangsbasis liefert, und die Verteilung des präsynaptischen Proteins wird mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie über die Gehirnregionen analysiert.

Protocol

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Alle Verfahren mit Tierproben wurden von der zuständigen Ethikkommission für Tiere überprüft und genehmigt.

>1. Immunfluoreszenz

  1. Bereiten Sie Lösungen vor, einschließlich des Blockierungspuffers, des Antikörperpuffers, des Waschpuffers 1 und des Waschpuffers 2 (siehe Tabelle 1).
  2. Spülen Sie die Scheiben einmal mit Phosphatpuffer (PB) ab, um überschüssige Verbindung mit optimaler Schnitttemperatur (OCT) zu entfernen.
    1. Entferne die Lösung mit einer Plastikpipette, ohne die Hirnschnitte einzusaugen. Fügen Sie 250 μl frisches PB mit einer 1000 μl Pipette hinzu.
      Vor....

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Disclosures

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Es wurden keine Interessenkonflikte angegeben.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1,5 mL ReaktionsgefäßeEppendorf30120094
50 mL ReaktionsgefäßeGreiner Bio-One227261
Multiwell 24 BrunnenFisher Scientific087721H
Kunststoffpipette (Einweg)Sarstedt8,61,176
Pipette für 1000 mLRainin17014382
2 ml PipetteEppendorf3123000012
Vortex Genius 3IKA3340001
Menzel ObjektträgerFisher ScientificArtikel-Nr.: 10144633CF
StereoskopLeica
LSM800ZeissKonfokales Mikroskop
PBS (10-fach)Roche11666789001
Tissue TekSakuraArtikel-Nr.: 4583Okt
Na2HPO4BioFroxxArtikel-Nr.: 5155KG001
NaH2PO4Merck1,06,34,60,500
Normales ZiegenserumMerck MilliporeNr. S26-100ML
Normales EselserumMerckS30-100ML
Triton X-100Merck1,08,60,31,000
Kaninchen Anti-MoverSynaptische SystemeRRID: AB_10804285
Meerschweinchen Anti-SynaptophysinSynaptische SystemeRRID: AB_1210382
Anti-Kaninchen für Esel AF647Jackson ImmunforschungRRID: AB_2492288
Anti-Maus für Ziegen AF488Jackson ImmunforschungRRID: AB_2337438
Mowiol4-88Calbiochem475904
ZEN2 blue SoftwareZeissMikroskopie-Software
FidschiBildJAnalyse-Software
Microsoft ExcelMicrosoft
kg GmbH

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